Антитела к ядерным антигенам ana. Антитела к ядерным антигенам (ANA), скрининг. Транспортная среда, пробирка
Антинуклеарные антитела (АНА, антиядерные антитела, антинуклеарный фактор) - показатель системных заболеваний соединительной ткани. Представляет собой группу аутоантител к белкам и другим компонентам, находящимся в ядрах клеток. Основные показания к применению: исключение диагноза - системная красная волчанка (считается, что АНА появляются в 90% случаев СКВ), дифференциальная диагностика системных коллагенозов (системная красная волчанка, склеродермия, узелковый периартериит, дерматомиозит), хронический активный гепатит.
- Общее внутри.
- Периферическое - флуоресценция происходит на краях ядра в лохматом виде.
При некоторых заболеваниях, например СКВ, системной склеродермии (системный склероз), некоторых инфекциях, иммунная система пациентов воспринимает ядра (белки ядер) клеток собственных тканей, как чужие, и продуцирует к ним антитела (антинуклеарные антитела - AHA). При этом они повреждают соединительную ткань, что и способствовало внедрению определения антинуклеарного фактора в качестве теста на системные заболевания соединительной ткани.
Врач должен также рассмотреть клинические симптомы пациента и другие диагностические тесты. История болезни также значительна, поскольку некоторые лекарственные средства, отпускаемые по рецепту, могут вызывать «индуцированные лекарством антиядерные антитела».
Что означают результаты?
- Системная красная волчанка - более 95%.
- Прогрессирующий системный склероз - от 60 до 90%.
При интерпретации данных следует учитывать, что спектр AHA включает в себя большую группу аутоантител к ДНК, нуклеопротеидам, гистонам, ядерным рибонуклеопротеидам и другим компонентам ядра. К настоящему времени описано более 200 разновидностей АНА, направленных против нуклеиновых кислот, гистонов, белков ядерной мембраны, компонентов сплайсосомы, рибонуклеоротеинов, белков ядрышек и центромер. Таким образом тест направлен на обнаружение различных антител к компонентам ядра и цитоплазмы, которые впервые были обнаружены при СКВ. В дальнейшем диагностические критерии теста были расширены в связи с обнаружением данных антител и при других заболевания соединительной ткани.
Интерферирующие факторы. Медикаменты
Антитела - это белки, которые вырабатываются в больших количествах иммунной системой. Они необходимы для распознавания и борьбы с инфекционными организмами в организме. Иногда эти антитела вызывают ошибку и ошибочно распознают нормальные белки в наших телах как чужие. Антиядерными антителами являются аутоантитела - антитела, которые нацелены на нормальные белки в ядре клетки. Это просто означает, что присутствуют аутоантитела. У вас просто положительный лабораторный тест без каких-либо признаков аутоиммунного заболевания.
В скрининговых тестах для определения суммарных АНА обычно используется набор следующих антигенов, являющихся основными маркерами аутоиммунных заболеваний соединительной ткани: SS-A (Ro), SS-B (La), Scl-70, Sm, RNP/Sm, J01, центромере B.
Основные антигены, применяющиеся в современных наборах для выявления ядерных антител класса IgG представлены следующим набором:
Как вы тестируете антиядерные антитела? Это просто анализ крови, но его следует проверять только в том случае, если у вас возникнут какие-либо симптомы, упомянутые выше. Производство этих аутоантител сильно зависит от возраста и увеличивается до 35% у здоровых людей в возрасте старше.
Но также помните, что если будет установлено, что у вас есть аутоиммунное заболевание, есть варианты лечения. Следующий шаг - увидеть ревматолога, который определит, требуется ли дополнительное тестирование, и кто будет следить за тем, чтобы вы заботились о своей конкретной ситуации.
- SS-A (Ro) - ядерные рибонуклеопротеины, (полипептиды). Антитела на них обнаруживаются, чаще, при системной склеродермии (60 % случаев), синдроме Шегрена (до 70% случаев) и при СКВ (до 30% случаев). Считается, что если данные антитела обнаруживаются в крови у беременных, то это является показателем риска увеличения возникновения неонатального волчаночноподобного синдрома у новорожденного ребенка (неонатальный люпус-синдром). Данные антитела матери проходят через плаценту и вызывают поражение плода, приводящие к гемолитической анемии и тромбоцитопении. К тяжелым последствиям относят поражение проводящей системы сердца ребенка (вплоть до постоянной кардиостимуляции). Отмечено, что у женщин у которых во время беременности был выявлен значительный титр данных антител, без явных клинических признаков, в дальнейшем развивается какое либо аутоиммунное заболевание, включая СКВ.
- SS-B (La) - ядерные белки. Антитела к ним выявляются до60% случаев при синдроме Шегрена и в 15% случаев при СКВ.
- Scl-70 - белок-фермент, участвующий в обмене нуклеиновых кислот (топоизомераза-1). Антитела на данный белок наиболее специфичны при системной склеродермии (до 70% случаев).
- Двухцепочечная ДНК - нативная ДНК. Антитела к ДНК наиболее специфичны при СКВ (до 80% случаев) и практически не определяются при ревматоидном артрите и склеродермии.
- RNP/Sm - Комплекс антигенов RNP/Sm состоит из U1-рибонуклеопротеидов: U1-68, U1-A, U1-C, U5, U6; а также из Sm-полипептидов: SmA | , SmB | B, SmD, SmE, SmF, SmG. Антитела, образующиеся к этим антигенам наиболее специфичны для смешанных заболеваний соединительной ткани - т.е. при наличии симптомов склеродермии, ревматоидного артрита, СКВ, полимиозита (около 95% случаев) и в меньшей степени для СКВ (до 30% случаев).
- Jo-1 - фермент - синтетаза аминоацилтранспортной РНК. Аутоантитела к данному белку являются диагностически значимыми при миозите (полимиозит/дерматомиозит).
- CENP-B (Центромера) - для выявления Антицетромерных антител (Anti-Centromer B), с целью диагностики CREST-синдрома (данный синдром представляет собой совокупность кальциноза кожи, синдрома Рейно, нарушения моторики пищевода, склеродактилии, телеангиэктазии. CREST-синдром относится к варианту системной склеродермии (системный склероз). Данные антитела у больных свидетельствуют о благоприятном течении системной склеродермии и говорят о небольшом поражении внутренних органов.
- Hep-2 клетки - клетки эпителиальной карциномы гортани человека линии Hep-2, содержащие много различных ядерных антигенов, включая антиген SS-A (Ro) и антигены центромеры. Антитела к Hep-2 обнаруживаются у больных с полимиозитом и дерматомиозитом до 90% случаев.
- Митохондрии (PDC). PDC - пируватдегидрогеназный комплекс. Большая группа антимитохондриальных антител представляют собой аутоантитела, которые образовались на ферменты пируватдегидрогеназного комплекса, располагающегося в митохондриях клеток и участвующего в окислительном декарбоксилировании пирувата.
Часто эти антитела обнаруживаются при билиарном циррозе печени.
Иммунный ответ, направленный против я, называется аутоиммунитетом. Первоначальная теория Эрлиха считала, что иммунная система обычно нацелена на чужеродные вещества и имеет встроенную тенденцию избегать нападения на само-ткани. Однако, когда этот процесс идет не так, иммунная система атакует собственные ткани, что приводит к аутоиммунным заболеваниям.
Для чего используется исследование?
Многие из этих заболеваний, как правило, трудно или невозможно вылечить, по той очевидной причине, что цель иммунного ответа, которая является само-антигеном, не может быть устранена. Лабораторное исследование аутоиммунных заболеваний. Для каждого диагноза требуется подробная история, физический осмотр и часто несколько лабораторных тестов. Однако ни один лабораторный тест не устанавливает такой диагноз. Как правило, диагностическая работа включает в себя множество тестов, включая полный анализ крови, воспалительные маркеры, проточную цитометрию и аутоантитела.
AHA обычно не проникают в живые клетки и поэтому безвредны. Но иногда они образуют комплексы антиген-антитело, которые вызывают повреждение ткани (как, например, при СКВ поражение почек). В связи с вовлечением в патологический процесс многих органов диагностическое значение определения AHA невелико и результаты анализа лишь частично подтверждают клинические данные.
Антиядерные антитела являются признаками многих аутоиммунных заболеваний соединительной ткани. Методы микроскопии и иммуноанализа имеют важное значение в лабораторной медицине. Косвенный иммунофлуоресцентный анализ. Лаборатории просматривают слайд под флуоресцентным микроскопом и сообщают результаты с рисунком и титрами окрашивания. Общие закономерности, отражающие типы антигенов, включают гомогенные, пятнистые, центромеры или ядрышки, все из которых предполагают ассоциации с некоторыми аутоиммунными заболеваниями.
Эти автоматизированные системы предлагают значительные улучшения в подготовке слайдов и программное обеспечение для чтения, анализа и интерпретации слайдов цифровых изображений. Автоматизированные системы демонстрируют очень высокое согласие с ручным методом. Тем не менее, лабораторное сообщество нуждается в дополнительных доказательствах для определения того, эффективно ли эта система идентифицирует антигены клинического значения и соответствуют ли различным автоматизированным системам соответствующий уровень соглашения о распознавании образов.
Помимо ревматических заболеваний, АНА обнаруживаются и при хроническом активном гепатите до 50% случаев.
- Сравнительная частота выявления антинуклеарных антител.
Заболевание и состояние Частота выявления, % Системная красная волчанка (СКВ) 95-100 Люпоидный гепатит 70-80 Синдром Фелти (Синдром Фелти - осложнение ревматоидного артрита. Определяется наличием трех патологий: ревматоидным артритом, увеличенной селезенкой (спленомегалией), снижением количества нейтрофилов). 95-100 Системная склеродермия 75-80 Лекарственный волчаночныи синдром (гидралазин, прокаинамид, изониазид) Около 50 Синдром Шегрена (Аутоиммунное системное поражение соединительной ткани. Характеризуется вовлечением в патологический процесс желез внешней секреции, главным образом слюнных и слезных, и хроническим прогрессирующим течением). 40-75 Клинически здоровые родственники пациента с СКВ Около 25 Дискоидная красная волчанка 15-50 Хронический ювенильный артрит, ревматоидный артрит 15-30 Узелковый периартериит 15-25 Дерматомиозит и полимиозит 10-30 Ревматизм Около 5 Прочие заболевания (болезнь Крона, неспецифический язвенный колит) 10-50
Описание
После промывки в лунки добавляют меченый лиганд для обнаружения связанного антитела. Однако он также имеет несколько недостатков, включая различия в субстратах, различия в обнаруженных изотипах и сродство к антителу. Недавние успехи в методах идентификации белка создали резервуар кандидатских биомолекул, создав таким образом аркаду для высокопроизводительных мультиплексных иммуноанализов, которые позволяют одновременную количественную оценку многих аналитов. Мультиплексные иммуноанализы дают обширную информацию о множественных белках в различных биологических процессах, тем самым предоставляя клиницистам и ученым понимание идентификации и оценки прогрессирования болезни.
Аутоиммунные заболевания, ревматология - ANA-профиль, кровь
Сроки исполнения: 5-7 рабочих дней*.
Биоматериал: кровь.
Описание:
Подготовка к исследованию: специальной подготовки не требуется
Справка: ANA-профиль – это определение аутоантител к ядерным антигенам, которые выявляются в крови при различных аутоиммунных заболеваниях. Данный профиль позволяет определить антитела класса IgG к 14 различным антигенам: nRNP, Sm, SS-A, Ro-52, SS-B, Scl-70, PM-Scl, Jo-1, CENP B, PCNA, dsDNA, AMA-M2, нуклеосомы, гистоны и рибосомальный белок P. Положительная реакция на отдельные антигены характерна для того или иного заболевания, поэтому данный тест удобно использовать для дифференциальной диагностики аутоиммунных болезней. Определяют anti-ANA-профиль методом иммуноблоттинга. Для этого используют стандартные наборы, включающие стрипы с нанесенными на них полосками с антигенами. Окрашивание той или иной полоски говорит о присутствии антител к данному антигену. По степени окрашивания результат может быть отрицательным, промежуточным, положительным и сильно положительным.
Показания к назначению: ифференциальная диагностика аутоиммунных заболеваний (системная красная волчанка, смешанное заболевание соединительной ткани, синдром Шегрена, системная склеродермия, включая CREST-синдром, дерматомиозит, полимиозит, первичный билиарный цирроз, ревматоидный артрит).
Нормальным показателем: для здоровых людей является отрицательный результат по всем 14 антигенам.
Интерпретация результатов: Как уже было сказано выше, присутствие в исследуемой сыворотке крови определенных антител вызывает окрашивание соответствующей ему полоски с антигеном. Положительный результат теста на один или несколько антигенов вкупе с клиническими проявлениями позволяет склониться к конкретному диагнозу аутоиммунного заболевания.
Антитела к Jo-1 определяются у 25-35% больных полимиозитом и у 10% больных дерматомиозитом. Их появление часто связано с развитием интерстициального легочного фиброза. Эти антитела практически не встречаются ни в норме, ни при других системных заболеваниях соединительной ткани.
Антитела к Scl-70 находят в 25-75% случаев у пациентов с прогрессирующим системным склерозом (системной склеродермией). Данный маркер служит плохим прогностическим признаком для течения заболевания. При ограниченной склеродермии не встречается.
Антитела к nRNP характерны для смешанного заболевания соединительной ткани (синдром Шарпа) в 95-100% случаев. Также эти антитела определяются у 30-40% пациентов с системной красной волчанкой, причем почти всегда в комбинации с антителами к Sm.
Антитела к Sm высокоспецифичны для системной красной волчанки, вместе с определением антител к двуспиральной ДНК они считаются патогомоничным признаком СКВ, но встречаются только у 5-10% пациентов.
Антитела к SS-A могут выявляться при различных аутоиммунных заболеваниях. Чаще всего их можно обнаружить при синдроме Шегрена (40-80% случаев) и системной красной волчанке (30-40% случаев). Присутствие этих антител в крови беременных увеличивает риск развития неонатального волчаночноподобного синдрома у новорожденных, при котором у них они обнаруживаются практически в 100% случаев. Главное и самое опасное проявление этого синдрома – врожденна блокада сердца, которое зачастую может потребовать проведения электрокардиостимуляции.
Антитела к SS-B находят почти исключительно у женщин (29:1) при синдроме Шегрена (40-80% случаев), а также при системной красной волчанке (10-20%). При СКВ эти антитела чаще можно выявить в начале болезни, развивающейся в пожилом возрасте. Антитела к SS-B в сочетании с антителами к SS-A вызывают развитие волчанки новорожденных.
Антитела к PM-Scl обнаруживают у 50-70% пациентов со смешанным заболеванием соединительной ткани (или перекрестным синдромом), который сочетает в себе симптомы дерматомиозита, полимиозита и системной склеродермии. Распространенность этих антител при диффузной форме системной склеродермии составляет всего 3% и около 8% при дерматомиозите и полимиозите.
Антитела к центромерам связаны с ограниченной формой системной склеродермии или CREST-синдромом, при котором их можно обнаружить у 70-90% пациентов.
Антитела к гистонам выявляется практически у всех пациентов с лекарственной волчанкой, индуцированной прокаинамидом, гидралазином и некоторыми другими препаратами (95% случаев). Кроме того антитела к гистонам находят у 30-70% пациентов с СКВ и у 15-50% больных ревматидным артритом.
Антитела к AMA-M2 характерны для первичного билиарного цирроза печени и часто коррелируют с его активностью. Они обнаруживаются еще в доклинической стадии и остаются на протяжении всего периода болезни. Их специфичность позволяет уменьшить необходимость выполнения биопсии печени для окончательной постановки диагноза. В низких титрах их можно обнаружить при других хронических заболеваниях печени (30% случаев) и при системной склеродермии (от 7% до 25%).
Антитела к нуклеосомам обнаруживаются при системной красной волчанке со специфичностью, близкой к 100%. Кроме того в сыворотке больного они появляются раньше, чем все остальные антинуклеарные антитела, что позволяет проводить раннюю диагностику данного заболевания. При других аутоиммунных болезнях антитела к нуклеосомам не определяются.
Антитела к PCNA специфичны для системной красной волчанки, но их превалирование среди других антител при этом заболевании составляет всего 3%.
Антитела к dsDNA высокоспецифичны для системной красной волчанки, они выявляются более чем в 90% случаев болезни. Однако, могут обнаруживаться и при других диффузных заболеваниях соединительной ткани, только значительно реже и в более низких концентрациях. Концентрация антител меняется соответственно активности течения системной красной волчанки.
Антитела к рибосомальным белкам P специфичны для СКВ. Их обнаруживают примерно в 10% случаев системной красной волчанки, а также в 12-13% у пациентов смешанным заболеванием соединительной ткани (Sharp-синдром), что указывает на волчаночный компонент в его патогенезе. Активность волчанки не коррелирует с титром этих антител. При других аутоиммунных заболеваниях антитела к рибосомальным белкам P не определяются.
Внимание!!! Следует помнить, что у некоторой части пациентов никакие антитела не выявляются даже при наличии у них аутоиммунного заболевания.
Для облегчения одновременного количественного определения множественных антигенов: планарных анализов массивов и микробиологических анализов были разработаны два основных формата анализа. В плоскопараллельных массивах анализируются различные лиганды захвата в определенных положениях на двумерном массиве. Затем проточная цитометрия обнаруживает специфический для анализа флуоресцентный сигнал, который позволяет одновременно обнаруживать множественные аналиты в одной реакции.
Недавно клинические диагностические лаборатории внедрили это технологическое продвижение в мультиплексном иммуноанализе для одновременного многократного анализа. Опыт работы с мультиплексной платформой. Эта система сочетает микросферы с различными лазерно-реактивными цветами с интересующими антигенами и объединяет их в одну микротитровальную скважину. В анализе используется двухканальная лазерная цитометрия, в которой первый лазер идентифицирует цвет борта, а второй идентифицирует наличие и количество аутоантител, связанных с антигеном.
