الدرس العملي رقم 2

الموضوع: الطريقة البكتريولوجية لتشخيص الأمراض المعدية.

الهدف: دراسة طرق عزل مزارع البكتيريا النقية وإتقان الطريقة البكتريولوجية لتشخيص الأمراض المعدية.

أسئلة للدراسة الذاتية:

1. قواعد جمع ونقل مواد الاختبار للأبحاث البكتريولوجية.

2قواعد تسجيل التحويلة للفحص البكتريولوجي.

3. طرق عزل الزراعات النقية للكائنات الحية الدقيقة.

4. طريقة التشخيص البكتريولوجية. هدف. مراحل. القيمة التشخيصية.

المفاهيم الأساسية للموضوع.

الطريقة البكتريولوجية هي الطريقة الرئيسية لتشخيص الأمراض المعدية. جوهرها هو تحديد نوع العامل المعدي، وبالتالي، بناء على نتائج الطريقة البكتريولوجية، يمكن إجراء التشخيص المسبب للمرض (النهائي). العيب الرئيسي لهذه الطريقة هو مدة الدراسة - من 3 إلى 5 أيام، وفي بعض الحالات أكثر.

يعتمد نجاح الطريقة البكتريولوجية إلى حد كبير على المرحلة الأولية، والتي تشمل جمع مادة الاختبار ونقلها، وتسجيل التحويل إلى المختبر البكتريولوجي. في هذه الحالة، من الضروري الامتثال لعدد من القواعد.

يجب أن يتم أخذ عينات من مادة الاختبار قبل بدء العلاج المضاد للبكتيريا أو بعد 8-10 ساعات من آخر جرعة. لتجنب تلوث العينة بالنباتات البيئية الدقيقة، يجب مراعاة التعقيم الصارم. للقيام بذلك، استخدم مادة معقمة: أ) مسحات القطن لأخذ المواد من الجرح، من الأغشية المخاطية (العينين والبلعوم والأنف)؛ ب) حلقة سلكية للمواد من المهبل والشرج؛ ج) حقنة لسحب الدم والقيح. د) أوعية معقمة للتجميع المباشر للبول والبلغم والبراز. يجب أن يتم نقل المواد الناتجة في أسرع وقت ممكن (2-3 ساعات) في حاويات أو حالات خاصة. يتم إرفاق الإحالة بالعينة السريرية كوثيقة مصاحبة. يحتوي على المعلومات الأساسية اللازمة لإجراء الدراسة الميكروبيولوجية:

الاسم الأخير، الاسم الأول، اسم العائلة، عمر المريض؛ التشخيص المفترض للمرض. العلاج المضاد للميكروبات السابق. طبيعة المادة تاريخ ووقت جمع المواد؛ الغرض من الدراسة اسم المؤسسة الطبية، رقم القسم، رقم الجناح؛ توقيع الطبيب المعالج.

يتم تنفيذ الطريقة البكتريولوجية على مرحلتين (الشكل 2.1):

عزل ثقافة نقية من مسببات الأمراض)؛ تحديد الثقافة النقية (1-3 أيام).

في المرحلة الأولى، يتم تلقيح مادة الاختبار على وسط غذائي صلب أو سائل، ويتم تقييم الخصائص الثقافية واختيار المستعمرات المشبوهة وفحصها على منحدر الآجار. تتضمن مرحلة التحديد دراسة إلزامية لخصائص وبنية المزرعة النقية المعزولة، بالإضافة إلى دراسات إضافية لتحديد حساسية المضادات الحيوية، وحساسية العاثيات، وكتابة العاثيات، ودراسة القدرة المرضية والخصائص المستمرة.

العمل المستقل للطلاب في الفصل.

الوظيفة 1

الهدف: إتقان طريقة التشخيص البكتريولوجي.

مهمة. تلقى المختبر البكتريولوجي مادة الاختبار (البراز) من مريض لديه تشخيص أولي: "عدوى سامة منقولة بالغذاء؟" كشف الفحص المجهري للمادة عن وجود مكورات إيجابية الجرام وعصيات سلبية الجرام.

عزل المزارع النقية للكائنات الحية الدقيقة والتعرف عليها. تحديد مسببات التسمم الغذائي.

المنهجية:

يتم تنفيذ جميع مراحل الطريقة البكتريولوجية بشكل تقليدي خلال درس واحد: يقوم الطالب بمعالجة المرحلة التالية، ويأخذ المادة إلى منظم الحرارة ويتلقى على الفور النتيجة النهائية للمرحلة التالية من الدراسة.

1. تلقيح مادة الاختبار على أجار في طبق بيتري باستخدام طريقة الفصل الميكانيكي من أجل الحصول على المستعمرات الفردية (اليوم 1).

يتم تعقيمها في لهب الموقد وتبريدها بحلقة، خذ مادة البذر وأضفها إلى الكوب، وافتح الغطاء قليلاً. على سطح الوسط المغذي، يتم توزيع المادة في حلقة على النحو التالي: عند حافة الكأس، يتم تشكيل منطقة بيضاوية بضربات متكررة، حيث يبقى جزء كبير من المادة، ثم يتم رسم ضربات متوازية عند مسافة 0.5 سم من إحدى حواف الكوب إلى الأخرى. عند البذر، يجب أن تظل الحلقة موازية للأجار حتى لا تخدش (الشكل 2.2.أ). بعد الغربلة، تتم إزالة الحلقة من الطبق وحرقها على الفور في اللهب، أثناء إغلاق طبق بيتري بغطاء. يتم وضع علامة على الكوب ووضعه رأسًا على عقب في منظم الحرارة لمدة يوم.

2. دراسة الخصائص الثقافية للمستعمرات المزروعة (اليوم الثاني).

وبعد يوم واحد، ومع البذر المناسب، تنمو المستعمرات الفردية عند اللمسات الأخيرة (الشكل 2.2.ب). يتم التمييز بين أنواع مختلفة من المستعمرات حسب الحجم واللون (الشكل 2.3.أ) والشكل والشفافية وطبيعة السطح (ناعم، خشن) والحافة (ناعمة، خشنة) (الشكل 2.3.ب). يتم تحضير مسحة من مادة جزء من المستعمرات وصبغها بالجرام وفحصها تحت المجهر. يتم غربلة ما تبقى من المستعمرة التي تتم دراستها بحلقة في أنبوب اختبار على أجار مغذي مائل للحصول على مزرعة نقية. يتم وضع البذر في منظم الحرارة ليوم واحد.

3. تحديد الثقافة النقية المعزولة (اليوم الثالث).

وبعد يوم واحد، يتم تحديد الثقافة النقية المزروعة من خلال خصائص الأنواع الرئيسية. تتم دراسة الشكل عن طريق الفحص المجهري لطخة من ثقافة نقية. ويتم تلقيح المزرعة النقية في أنظمة الاختبار (اختبار المكورات العنقودية، والاختبار المعوي) لدراسة النشاط. للقيام بذلك، قم بإعداد مليار معلق من البكتيريا في محلول فسيولوجي، ثم أضف 0.1 مل من المعلق إلى آبار نظام الاختبار باستخدام الجرعات أو ماصات باستور. يتم وضع الجهاز اللوحي في منظم الحرارة لمدة يوم.

4. تحديد نوع الكائنات الحية الدقيقة المعزولة (اليوم الرابع).

وبعد مرور 24 ساعة يتم تقييم نتائج النشاط البيوكيميائي من خلال تغير لون المؤشر الموجود في البئر ومقارنتها بجداول نظام الاختبار. وبناء على نتائج دراسة خصائص الزراعات النقية المعزولة يتم تحديد أنواع الكائنات الحية الدقيقة، وهو أحد الأهداف النهائية لطريقة التشخيص البكتريولوجي. استخدم محدد بيرجي.

ويتم توثيق النتيجة في شكل بروتوكول بحث.

بروتوكول الدراسة.

الطريقة الرئيسية للتشخيص الميكروبيولوجي و "المعيار الذهبي" لعلم الأحياء المجهرية هي الطريقة البكتريولوجية.

الغرض من الطريقة البكتريولوجيةيتكون من عزل ثقافة نقية من العامل الممرض من مادة الاختبار، وتجميع ثقافة نقية وتحديد هذه الثقافة من خلال مجموعة من الخصائص: المورفولوجية، الصبغية، الثقافية، البيوكيميائية، المستضدية، من خلال وجود عوامل الإمراضية، والسمية وتحديد حساسيتها للأدوية المضادة للميكروبات والعاثيات.

تشمل طريقة البحث البكتريولوجي ما يلي:

1. تلقيح مادة الاختبار في الأوساط المغذية

2. عزل الثقافة النقية

3. تحديد الكائنات الحية الدقيقة (تحديد الأنواع).

يتضمن عزل وتحديد المزارع النقية للبكتيريا الهوائية واللاهوائية إجراء الدراسات التالية:

المرحلة الأولى (العمل مع المواد الأصلية)

الهدف: الحصول على مستعمرات معزولة

1. الفحص المجهري الأولي يعطي فكرة تقريبية عن النباتات الدقيقة

2. إعداد المواد للبحث (التخفيف بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر، وما إلى ذلك)

3. الزراعة على أوساط مغذية صلبة للحصول على مستعمرات معزولة

4. الحضانة عند درجة الحرارة المثالية، في أغلب الأحيان 37 درجة مئوية، لمدة 18-24 ساعة

المرحلة الثانية

الهدف: الحصول على ثقافة نقية

1. الدراسة العيانية مستعمراتفي الضوء المنقول والمنعكس (خصائص الحجم والشكل واللون والشفافية والاتساق والبنية والكفاف وسطح المستعمرات).

2. الفحص المجهري للمستعمرات المعزولة

3. اختبار التحمل الهوائي (للتأكد من وجود اللاهوائيات الصارمة في مادة الاختبار).

4. زرع المستعمرات المميزة لنوع معين على أوساط تراكمية نقية أو أوساط انتقائية وحضانة تحت الظروف المثلى.

المرحلة الثالثة

الهدف: التعرف على الثقافة النقية المعزولة

1. للتعرف على الثقافة المختارة بناء على مجموعة من الخصائص البيولوجية تم دراسة ما يلي:

· المورفولوجية والخصائص الصبغية

· الخصائص الثقافية (طبيعة النمو على الوسائط المغذية)

· الخواص البيوكيميائية (النشاط الأنزيمي للكائنات الحية الدقيقة، وتحلل السكر، والتحلل البروتيني وغيرها من الأنشطة)

الخصائص المصلية (المستضدية)

· الخصائص الخبيثة (القدرة على إنتاج العوامل المسببة للأمراض: السموم والإنزيمات وعوامل الدفاع والعدوان)

المسببة للأمراض للحيوانات

· قابلية البلعمة (الحساسية تجاه العاثيات التشخيصية)

حساسية للمضادات الحيوية

· خصائص فردية أخرى

المرحلة الرابعة (الاستنتاج)

بناء على الخصائص المدروسة، يتم التوصل إلى استنتاج حول الثقافة المختارة.

المرحلة الأولى من البحث.يبدأ فحص المواد المرضية بالفحص المجهري. يتيح الفحص المجهري للمادة الأصلية الملطخة إمكانية تحديد تكوين المشهد الميكروبي للكائن قيد الدراسة تقريبًا وبعض السمات المورفولوجية للكائنات الحية الدقيقة. تحدد نتائج الفحص المجهري للمادة الأصلية إلى حد كبير مسار البحث الإضافي، ويتم مقارنتها لاحقًا بالبيانات التي تم الحصول عليها عن طريق التلقيح على الوسائط المغذية.

إذا كان هناك محتوى كاف من الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض في العينة، يتم إجراء التلقيح على وسائط مغذية صلبة (للحصول على مستعمرات معزولة). إذا كان هناك عدد قليل من البكتيريا في مادة الاختبار، فسيتم إجراء التلقيح على الوسائط المغذية السائلة. يتم اختيار الوسائط المغذية وفقًا لمتطلبات الكائنات الحية الدقيقة.

لا يمكن زراعة الكائنات الحية الدقيقة إلا في حالة تهيئة الظروف المثلى لنشاطها الحيوي ومراعاة القواعد التي تستبعد التلوث (التلوث العرضي بواسطة الميكروبات الأجنبية) للمادة قيد الدراسة. يمكن إنشاء الظروف الاصطناعية التي من شأنها أن تمنع تلوث الثقافة بأنواع أخرى في أنبوب اختبار أو قارورة أو طبق بيتري. يجب أن تكون جميع الأواني الزجاجية ووسائط الزرع معقمة، وبعد تلقيحها بالمواد الميكروبية، تكون محمية من التلوث الخارجي، ويتم ذلك باستخدام السدادات أو الأغطية والأغطية المعدنية. يجب إجراء عمليات التلاعب بمادة الاختبار في منطقة اللهب لمصباح الكحول لمنع تلوث المادة من البيئة الخارجية، وكذلك لغرض الامتثال للوائح السلامة.

يجب أن يتم تلقيح المادة على الوسائط المغذية في موعد لا يتجاوز ساعتين من لحظة التجميع.

المرحلة الثانية من البحث.دراسة المستعمرات وعزل الثقافات النقية. بعد يوم من الحضانة، تنمو المستعمرات على الأطباق، وفي الضربة الأولى يكون النمو مستمرًا، وفي الضربات التالية - مستعمرات معزولة. المستعمرة عبارة عن مجموعة من الميكروبات من نفس النوع تنمو من خلية واحدة. نظرًا لأن المادة غالبًا ما تكون عبارة عن خليط من الميكروبات، فإن عدة أنواع من المستعمرات تنمو. تم تحديد المستعمرات المختلفة بقلم رصاص، مع تحديدها في دائرة من الأسفل، ويتم دراستها (الجدول 12). بادئ ذي بدء، تتم دراسة المستعمرات بالعين المجردة: العلامات العيانية. يُنظر إلى الكأس (دون فتحه) من الأسفل في الضوء المنقول، وتُلاحظ شفافية المستعمرات (شفاف إذا لم يحجب الضوء؛ نصف شفاف إذا كان يحجب الضوء جزئيًا؛ معتم إذا لم يمر الضوء عبره). مستعمرة)، ويتم قياس حجم المستعمرات (مم). ثم يدرسون المستعمرات من جهة الجفن، ويلاحظون الشكل (منتظم، مستدير، غير منتظم، مسطح، محدب)، وطبيعة السطح (ناعم، لامع، باهت، خشن، متجعد، رطب، جاف، لزج)، اللون (عديم اللون، ملون).

الجدول 12. مخطط لدراسة المستعمرات

№	لافتة	الخصائص المحتملة للمستعمرات
1.	استمارة	مسطحة، محدبة، قبة، مكتئبة، مستديرة، وردية، نجمة
2.	الحجم، مم	كبير (4-5 مم)، متوسط ​​(2-4 مم)، صغير (1-2 مم)، قزم (< 1 мм)
3.	الطابع السطحي	ناعم (شكل S)، خشن (شكل R)، لزج (شكل M)، مخطط، متكتل، غير لامع، لامع
4.	لون	عديم اللون، ملون... لون
5.	الشفافية	شفاف، معتم، شفاف
6.	طابع الحواف	أملس، خشن، مهدب، ليفي، صدفي
7.	الهيكل الداخلي	متجانسة، حبيبية، غير متجانسة
8.	تناسق	لزج، لزج، متفتت
9.	الاستحلاب في قطرة ماء	جيدة، سيئة

ملحوظة: تتم دراسة النقاط 5-7 بتكبير منخفض للمجهر أو تحت عدسة مكبرة.

يمكنك رؤية الاختلافات بين المستعمرات بشكل أفضل عند مشاهدتها بالتكبير. للقيام بذلك، ضع كوبًا مغلقًا بحيث يكون الجزء السفلي لأعلى على المسرح، وقم بخفض المكثف قليلاً، واستخدم تكبيرًا طفيفًا للعدسة (x8)، وحرك الكوب، وادرس السمات المجهرية للمستعمرات: طبيعة الحافة ( ناعمة، متموجة، خشنة، صدفية)، بنية (متجانسة، حبيبية، ليفية، متجانسة، أو مختلفة في المركز والمحيط).

بعد ذلك، تتم دراسة مورفولوجية الخلايا الميكروبية من المستعمرات. للقيام بذلك، يتم عمل مسحات من جزء من كل مستعمرة محددة وصبغها بالجرام. عند أخذ المستعمرات، انتبه إلى القوام (جاف، إذا كانت المستعمرة متفتتة ويصعب أخذها؛ ناعم، إذا تم أخذها بسهولة باستخدام حلقة؛ لزج، إذا تم سحب المستعمرة بواسطة الحلقة؛ صلب، إذا كان جزء من لا يتم أخذ المستعمرة بحلقة، يمكنك فقط إزالة المستعمرة بأكملها).

عند فحص المسحات يتم التأكد من أن المستعمرة ممثلة بنوع واحد من الميكروبات، وبالتالي يمكن عزل مزارع البكتيريا النقية. للقيام بذلك، يتم إعادة زرع المستعمرات المدروسة على أجار مائل. عند إعادة البذر من المستعمرات، يجب الحرص على أخذ المستعمرات المقصودة بالضبط، دون لمس المستعمرات القريبة بالحلقة. يتم وضع علامة على الأنابيب وحضنها في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.

المرحلة الثالثة من البحث.تحديد الثقافة المعزولة. تحديد الميكروبات - تحديد الموقع المنهجي للثقافة المعزولة من مادة إلى الأنواع والمتغيرات. الشرط الأول لتحديد الهوية بشكل موثوق هو النقاء غير المشروط للثقافة. لتحديد الميكروبات، يتم استخدام مجموعة من الخصائص: المورفولوجية (الشكل، الحجم، وجود الأسواط، الكبسولات، الجراثيم، الموقع النسبي في اللطاخة)، الصبغية (العلاقة بصبغة جرام أو طرق أخرى)، الكيميائية (نسبة الجوانين + السيتوزين). في جزيء الحمض النووي)، الثقافي (الاحتياجات الغذائية، ظروف الزراعة، معدل وطبيعة النمو في مختلف الوسائط المغذية)، الأنزيمية (انهيار المواد المختلفة مع تكوين المنتجات الوسيطة والنهائية)، المصلية (البنية المستضدية، الخصوصية)، البيولوجية (الفوعة للحيوانات، السمية، الحساسية، تأثير المضادات الحيوية وغيرها).

بالنسبة للتمايز الكيميائي الحيوي، يدرسون قدرة البكتيريا على تخمير الكربوهيدرات مع تكوين المنتجات النهائية الوسيطة، والقدرة على تحلل البروتينات والببتونات، ودراسة إنزيمات الأكسدة والاختزال.

لدراسة الانزيمات المحللة للسكريتم تلقيح الثقافات المعزولة في أنابيب اختبار مع وسائط شبه سائلة تحتوي على اللاكتوز والجلوكوز والكربوهيدرات الأخرى والكحوليات المتعددة الهيدرات. بالنسبة للوسائط شبه السائلة، يتم التلقيح عن طريق الحقن في عمق الوسط. عند البذر عن طريق الحقن، يتم تثبيت أنبوب الاختبار مع الوسيط بزاوية، ويتم إزالة السدادة، ويتم حرق حافة أنبوب الاختبار. يتم أخذ المادة بحلقة معقمة ويتم ثقب عمود الوسط المغذي بها إلى الأسفل تقريبًا.

لتحديد الانزيمات المحللة للبروتينتزرع الثقافة المعزولة على ماء الببتون أو MPB. للقيام بذلك، خذ أنبوب الاختبار مع التلقيح الأقرب إليك في يدك، وأنبوب الاختبار مع الوسيط بعيدًا عنك. يتم فتح كلا أنبوبي الاختبار في نفس الوقت، مع الإمساك بسدادتيهما بالإصبع الصغير وحافة راحة اليد، وحرق حواف أنبوبي الاختبار، باستخدام حلقة مكلسة مبردة لانتزاع القليل من الثقافة ونقلها إلى أنبوب الاختبار الثاني قم بطحنه في وسط سائل على جدار أنبوب الاختبار ثم اغسله بالوسط.

عند البذر وإعادة البذر، ينبغي إيلاء الاهتمام للامتثال لقواعد العقم، حتى لا تلوث محاصيلك بالنباتات الدقيقة الأجنبية، وكذلك عدم تلويث البيئة. يتم وضع علامة على الأنابيب ووضعها في منظم الحرارة للحضانة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.

خاتمة

المحاسبة عن النتائج. خاتمة الدراسة. يتم أخذ نتائج التحديد في الاعتبار، واستنادًا إلى مجمل البيانات التي تم الحصول عليها، واستنادًا إلى تصنيف وخصائص السلالات النموذجية الموصوفة في الدليل (مفتاح بورغي، 1994-1996)، يتم تحديد نوع المحاصيل المعزولة.

5. الأشكال الأساسية للبكتيريا

6. الطريقة المجهرية لتشخيص الأمراض المعدية

7. طرق الرسم البسيطة والمعقدة

8. آليات صبغة جرام وزيل نيلسن

ثالثا. خطة العمل العملية

رابعا. أمثلة على المهام الظرفية

الموضوع الثاني: طرق الرسم الخاصة. جهاز المجهر البيولوجي. صِنف

أولاً: أسئلة الإعداد الذاتي:

ثانيا. النص الأساسي

1. طرق تلطيخ خاصة لتحديد الهياكل البكتيرية الفردية

2. طرق تلطيخ المجموعات الفردية المؤيدة وحقيقيات النوى

3. دراسة حركة الكائنات الحية الدقيقة

4. أنواع الفحص المجهري

5. تصميم المجهر البيولوجي

6. إجراءات الفحص المجهري بالغمر

ثالثا. خطة العمل العملية

رابعا. أمثلة على المهام الظرفية

الموضوع 3: التشكل والبنية التحتية للمجموعات الفردية من الكائنات الحية الدقيقة: الريكتسيا، الكلاميديا، الميكوبلازما، الشعيات، اللولبيات، الفطريات، الأوليات

أولاً: أسئلة الإعداد الذاتي:

ثانيا. النص الأساسي

ثالثا. خطة العمل العملية

رابعا. أمثلة على المهام الظرفية

الأسئلة النظرية لاختبار المعرفة النصفي

قائمة المهارات العملية

الوحدة ιι "فسيولوجيا الكائنات الحية الدقيقة"

أولاً: أسئلة الإعداد الذاتي:

ثانيا. النص الأساسي

1. تكوين ومتطلبات الوسائط الغذائية

2. تصنيف وسائل الإعلام الثقافية

3. مفاهيم العقامة والمطهرات

4. مفهوم التطهير وطرق التطهير ومراقبة فعالية التطهير

5. مفهوم التعقيم وطرقه ومعداته وطرق التعقيم

6. طرق تحديد فعالية التعقيم

7. مفهوم الأنواع والسلالة والمستعمرة والاستزراع النقي للكائنات الحية الدقيقة

8. طرق عزل المزارع النقية للكائنات الحية الدقيقة

9. الطريقة البكتريولوجية لتشخيص الأمراض المعدية

10. تقنية تلقيح الكائنات الحية الدقيقة

11. مميزات زراعة البكتيريا اللاهوائية

ثالثا. خطة العمل العملية

رابعا. أمثلة على المهام الظرفية

تشخيص الأمراض المعدية.

المرحلة الأولى.

المرحلة الثانية. الهدف: تراكم الثقافة النقية

المرحلة الثالثة. الهدف: التعرف على الثقافة محل الدراسة

المرحلة الرابعة.

الموضوع الثاني: فسيولوجيا البكتيريا. التغذية والتنفس والتكاثر والتمثيل الغذائي وأنظمة الإنزيمات في البكتيريا. الطريقة البكتريولوجية لتشخيص الأمراض المعدية (اليوم الثاني).

أولاً: أسئلة الإعداد الذاتي:

ثانيا. النص الأساسي

1. استقلاب الكائنات الحية الدقيقة

2. أنظمة الإنزيمات للكائنات الحية الدقيقة

4. آليات التغذية البكتيرية

6. تصنيف البكتيريا حسب نوع التنفس – الأكسدة البيولوجية.

7. التخمير وأنواعه

8. ظروف زراعة البكتيريا

9. نمو وتكاثر البكتيريا. مراحل التكاثر البكتيري

10. طريقة البحث البكتريولوجي. تنفيذ المرحلة الثانية من الطريقة البكتريولوجية لعزل الكائنات الهوائية. الخصائص الثقافية للبكتيريا.

ثالثا. خطة العمل العملية

4. املأ جدول "تصنيف الكائنات الحية الدقيقة حسب نوع التنفس"

رابعا. أمثلة على المهام الظرفية

الموضوع الثالث: التعرف على الثقافات النقية. النشاط الكيميائي الحيوي للبكتيريا. الطريقة البكتريولوجية لتشخيص الأمراض المعدية (3 أيام).

1. تنفيذ المرحلة الثالثة من الطريقة البكتريولوجية لعزل الزراعات النقية للكائنات الحية الدقيقة. مخطط تحديد الكائنات الحية الدقيقة

2. تحديد درجة نقاء الثقافة المعزولة

3. استخدام النشاط الأنزيمي البكتيري للتعرف على الكائنات الحية الدقيقة

4. طرق تحديد نشاط تحلل السكر في الكائنات الحية الدقيقة

5. طرق تحديد نشاط التحلل البروتيني للبكتيريا

6. تحديد إنزيمات الأكسدة والاختزال البكتيرية

7. أنظمة التعرف البيوكيميائية على البكتيريا

ثالثا. خطة العمل العملية

رابعا. أمثلة على المهام الظرفية

الوحدة الثالثة "أساسيات العلاج الكيميائي المضاد للبكتيريا"

2. آليات عمل المضادات الحيوية على الكائنات الحية الدقيقة

3. الآثار الجانبية للمضادات الحيوية

4. آليات مقاومة الكائنات الحية الدقيقة للمضادات الحيوية

5. طرق تحديد حساسية الكائنات الحية الدقيقة للمضادات الحيوية

ثالثا. خطة العمل العملية

رابعا. أمثلة على المهام الظرفية

الوحدة الثالثة "العدوى والعمليات المعدية"

الموضوع 2: العملية المعدية. عوامل التسبب في البكتيريا. الطريقة البيولوجية لتشخيص الأمراض المعدية

النص الأساسي

1. عقيدة العدوى. مفاهيم "العدوى" و"الأمراض المعدية"

3. تصنيفات الأمراض المعدية وأشكال العدوى

4. فترات ونتائج الأمراض المعدية

5. الإمراضية والفوعة، وحدات الفوعة

6. العوامل الرئيسية المسببة للأمراض من الكائنات الحية الدقيقة

7. السموم الميكروبية

8. الطريقة البيولوجية لتشخيص الأمراض المعدية

ثالثا. خطة العمل العملية

رابعا. أمثلة على المهام الظرفية

الوحدة الثالثة "بيئة الكائنات الحية الدقيقة. "أساسيات علم الأحياء الدقيقة الصحية"

الموضوع الثالث: البكتيريا في جسم الإنسان. الفحص الصحي والبكتريولوجي للمياه والهواء والتربة

أولاً: أسئلة الإعداد الذاتي:

II. النص الأساسي

2. وظائف البكتيريا الطبيعية في جسم الإنسان

3. طرق تحديد البكتيريا في جسم الإنسان

4. التعريف بمفهوم الديسبيوسيس وأسباب حدوثه

5. مبادئ تشخيص وعلاج دسباقتريوز

6. موضوع الأحياء الدقيقة الصحية ومتطلبات الكائنات الحية الدقيقة الإرشادية الصحية

7. البكتيريا في الماء والهواء والتربة

8. طرق تحديد الكائنات الحية الدقيقة ذات المؤشر الصحي في الماء والهواء والتربة

ثالثا. خطة العمل العملية

رابعا. أمثلة على المهام الظرفية

الأسئلة النظرية لاختبار المعرفة النصفي

قائمة المهارات العملية

الأدب

9. الطريقة البكتريولوجية لتشخيص الأمراض المعدية

الطريقة الرئيسية للتشخيص الميكروبيولوجي و "المعيار الذهبي" لعلم الأحياء المجهرية هي الطريقة البكتريولوجية.

الغرض من الطريقة البكتريولوجيةيتكون من عزل ثقافة نقية من العامل الممرض من مادة الاختبار، وتجميع ثقافة نقية وتحديد هذه الثقافة من خلال مجموعة من الخصائص: المورفولوجية، الصبغية، الثقافية، البيوكيميائية، المستضدية، من خلال وجود عوامل الإمراضية، والسمية وتحديد حساسيتها للأدوية المضادة للميكروبات والعاثيات.

تشمل طريقة البحث البكتريولوجي ما يلي:

1. تلقيح مادة الاختبار في الأوساط المغذية

2. عزل الثقافة النقية

3. تحديد الكائنات الحية الدقيقة (تحديد الأنواع).

يتضمن عزل وتحديد المزارع النقية للبكتيريا الهوائية واللاهوائية إجراء الدراسات التالية:

المرحلة الأولى (العمل مع المواد الأصلية)

الهدف: الحصول على مستعمرات معزولة

1. الفحص المجهري الأولي يعطي فكرة تقريبية عن النباتات الدقيقة

2. إعداد المادة للبحث

3. الزراعة على أوساط مغذية صلبة للحصول على مستعمرات معزولة

4. الحضانة عند درجة الحرارة المثالية، في أغلب الأحيان 37 درجة مئوية، لمدة 18-24 ساعة

المرحلة الثانية

الهدف: الحصول على ثقافة نقية

1. دراسة مجهرية للمستعمرات في الضوء المنقول والمنعكس (خصائص الحجم، الشكل، اللون، الشفافية، الاتساق، البنية، الكفاف، سطح المستعمرات).

2. الفحص المجهري للمستعمرات المعزولة

3. اختبار التحمل الهوائي (للتأكد من وجود اللاهوائيات الصارمة في مادة الاختبار).

4. زرع المستعمرات المميزة لنوع معين على أوساط تراكمية نقية أو أوساط انتقائية وحضانة تحت الظروف المثلى.

المرحلة الثالثة

الهدف: التعرف على الثقافة النقية المعزولة

1. للتعرف على الثقافة المختارة بناء على مجموعة من الخصائص البيولوجية تم دراسة ما يلي:

التشكل والخصائص الصبغية

الخصائص الثقافية (نمط النمو على الوسائط المغذية)

الخواص البيوكيميائية (النشاط الأنزيمي للكائنات الحية الدقيقة)

الخصائص المصلية (المستضدية)

خصائص ضارة (القدرة على إنتاج العوامل المسببة للأمراض: السموم والإنزيمات وعوامل الدفاع والعدوان)

المسببة للأمراض للحيوانات

قابلية البلعمة (الحساسية تجاه العاثيات التشخيصية)

حساسية للمضادات الحيوية

خصائص فردية أخرى

المرحلة الرابعة (الاستنتاج)

بناء على الخصائص المدروسة، يتم التوصل إلى استنتاج حول الثقافة المختارة.

المرحلة الأولى من البحث.يبدأ فحص المواد المرضية بالفحص المجهري. يتيح الفحص المجهري للمادة الأصلية الملطخة إمكانية تحديد تكوين المشهد الميكروبي للكائن قيد الدراسة تقريبًا وبعض السمات المورفولوجية للكائنات الحية الدقيقة. تحدد نتائج الفحص المجهري للمادة الأصلية إلى حد كبير مسار البحث الإضافي، ويتم مقارنتها لاحقًا بالبيانات التي تم الحصول عليها عن طريق التلقيح على الوسائط المغذية.

إذا كان هناك محتوى كاف من الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض في العينة، يتم إجراء التلقيح على وسائط مغذية صلبة (للحصول على مستعمرات معزولة). إذا كان هناك عدد قليل من البكتيريا في مادة الاختبار، فسيتم إجراء التلقيح على الوسائط المغذية السائلة. يتم اختيار الوسائط المغذية وفقًا لمتطلبات الكائنات الحية الدقيقة.

لا يمكن زراعة الكائنات الحية الدقيقة إلا في حالة تهيئة الظروف المثلى لنشاطها الحيوي ومراعاة القواعد التي تستبعد التلوث (التلوث العرضي بواسطة الميكروبات الأجنبية) للمادة قيد الدراسة. يمكن إنشاء الظروف الاصطناعية التي من شأنها أن تمنع تلوث الثقافة بأنواع أخرى في أنبوب اختبار أو قارورة أو طبق بيتري. يجب أن تكون جميع الأواني الزجاجية ووسائط الزرع معقمة، وبعد تلقيحها بالمواد الميكروبية، تكون محمية من التلوث الخارجي، ويتم ذلك باستخدام السدادات أو الأغطية والأغطية المعدنية. يجب إجراء عمليات التلاعب بمادة الاختبار في منطقة اللهب لمصباح الكحول لمنع تلوث المادة من البيئة الخارجية، وكذلك لغرض الامتثال للوائح السلامة.

يجب أن يتم تلقيح المادة على الوسائط المغذية في موعد لا يتجاوز ساعتين من لحظة التجميع.

المرحلة الثانية من البحث.دراسة المستعمرات وعزل الثقافات النقية. بعد يوم من الحضانة، تنمو المستعمرات على الأطباق، وفي الضربة الأولى يكون النمو مستمرًا، وفي الضربات التالية - مستعمرات معزولة. المستعمرة عبارة عن مجموعة من الميكروبات من نفس النوع تنمو من خلية واحدة. نظرًا لأن المادة غالبًا ما تكون عبارة عن خليط من الميكروبات، فإن عدة أنواع من المستعمرات تنمو. تم تحديد المستعمرات المختلفة بقلم رصاص، مع تحديدها بدائرة من الأسفل، ويتم دراستها (الجدول 11). بادئ ذي بدء، تتم دراسة المستعمرات بالعين المجردة: العلامات العيانية. يُنظر إلى الكأس (دون فتحه) من الأسفل في الضوء المنقول، وتُلاحظ شفافية المستعمرات (شفاف إذا لم يحجب الضوء؛ نصف شفاف إذا كان يحجب الضوء جزئيًا؛ معتم إذا لم يمر الضوء عبره). مستعمرة)، ويتم قياس حجم المستعمرات (مم). ثم يدرسون المستعمرات من جهة الجفن، ويلاحظون الشكل (منتظم، مستدير، غير منتظم، مسطح، محدب)، وطبيعة السطح (ناعم، لامع، باهت، خشن، متجعد، رطب، جاف، لزج)، اللون (عديم اللون، ملون).

الجدول 11. مخطط لدراسة المستعمرات

		الخصائص المحتملة للمستعمرات
		مسطحة، محدبة، مقببة، مكتئبة، مستديرة، وردية، نجمة
	الحجم، مم	كبير (4-5 مم)، متوسط ​​(2-4 مم)، صغير (1-2 مم)، قزم (< 1 мм)
	الطابع السطحي	ناعم (شكل S)، خشن (شكل R)، لزج (شكل M)، مخطط، متكتل، غير لامع، لامع
		عديم اللون، ملون
	الشفافية	شفاف، معتم، شفاف
	طابع الحواف	أملس، خشن، مهدب، ليفي، صدفي
	الهيكل الداخلي	متجانسة، حبيبية، غير متجانسة
	تناسق	لزج، لزج، متفتت
	الاستحلاب في قطرة ماء	جيدة، سيئة

ملاحظة: تتم دراسة النقاط 5-7 عند التكبير المجهري المنخفض.

يمكنك رؤية الاختلافات بين المستعمرات بشكل أفضل عند مشاهدتها بالتكبير. للقيام بذلك، ضع كوبًا مغلقًا بحيث يكون الجزء السفلي لأعلى على المسرح، وقم بخفض المكثف قليلاً، واستخدم تكبيرًا طفيفًا للعدسة (x8)، وحرك الكوب، وادرس السمات المجهرية للمستعمرات: طبيعة الحافة ( ناعمة، متموجة، خشنة، صدفية)، بنية (متجانسة، حبيبية، ليفية، متجانسة، أو مختلفة في المركز والمحيط).

بعد ذلك، تتم دراسة مورفولوجية الخلايا الميكروبية من المستعمرات. للقيام بذلك، يتم عمل مسحات من جزء من كل مستعمرة محددة وصبغها بالجرام. عند أخذ المستعمرات، انتبه إلى القوام (جاف، إذا كانت المستعمرة متفتتة ويصعب أخذها؛ ناعم، إذا تم أخذها بسهولة باستخدام حلقة؛ لزج، إذا تم سحب المستعمرة بواسطة الحلقة؛ صلب، إذا كان جزء من لا يتم أخذ المستعمرة بحلقة، يمكنك فقط إزالة المستعمرة بأكملها).

عند فحص المسحات يتم التأكد من أن المستعمرة ممثلة بنوع واحد من الميكروبات، وبالتالي يمكن عزل مزارع البكتيريا النقية. للقيام بذلك، يتم إعادة زرع المستعمرات المدروسة على أجار مائل. عند إعادة البذر من المستعمرات، يجب الحرص على أخذ المستعمرات المقصودة بالضبط، دون لمس المستعمرات القريبة بالحلقة. يتم وضع علامة على الأنابيب وحضنها في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.

المرحلة الثالثة من البحث.تحديد الثقافة المعزولة. تحديد الميكروبات - تحديد الموقع المنهجي للثقافة المعزولة من مادة إلى الأنواع والمتغيرات. الشرط الأول لتحديد الهوية بشكل موثوق هو النقاء غير المشروط للثقافة. لتحديد الميكروبات، يتم استخدام مجموعة من الخصائص: المورفولوجية (الشكل، الحجم، وجود الأسواط، الكبسولات، الجراثيم، الموقع النسبي في اللطاخة)، الصبغية (العلاقة بصبغة جرام أو طرق أخرى)، الكيميائية (نسبة الجوانين + السيتوزين). في جزيء الحمض النووي)، الثقافي (الاحتياجات الغذائية، ظروف الزراعة، معدل وطبيعة النمو في مختلف الوسائط المغذية)، الأنزيمية (انهيار المواد المختلفة مع تكوين المنتجات الوسيطة والنهائية)، المصلية (البنية المستضدية، النوعية)، البيولوجية (الفوعة). للحيوانات، السمية، الحساسية، تأثير المضادات الحيوية، الخ).

للتمايز الكيميائي الحيوي، قدرة البكتيريا على تخمير الكربوهيدرات مع تكوين وسيطة و المنتجات النهائية، والقدرة على تحليل البروتينات والببتونات، ودراسة إنزيمات الأكسدة والاختزال.

لدراسة الإنزيمات المحللة للسكر، يتم تلقيح المزارع المعزولة في أنابيب اختبار باستخدام وسائط شبه سائلة تحتوي على اللاكتوز والجلوكوز والكربوهيدرات الأخرى والكحوليات متعددة الهيدرات. بالنسبة للوسائط شبه السائلة، يتم التلقيح عن طريق الحقن في عمق الوسط. عند البذر عن طريق الحقن، يتم تثبيت أنبوب الاختبار مع الوسيط بزاوية، ويتم إزالة السدادة، ويتم حرق حافة أنبوب الاختبار. يتم أخذ المادة بحلقة معقمة ويتم ثقب عمود الوسط المغذي بها إلى الأسفل تقريبًا.

لتحديد الإنزيمات المحللة للبروتين، يتم تلقيح المزرعة المعزولة على ماء الببتون أو MPB. للقيام بذلك، خذ أنبوب الاختبار مع التلقيح الأقرب إليك في يدك، وأنبوب الاختبار مع الوسيط بعيدًا عنك. يتم فتح كلا أنبوبي الاختبار في نفس الوقت، مع الإمساك بسدادتيهما بالإصبع الصغير وحافة راحة اليد، وحرق حواف أنبوبي الاختبار، باستخدام حلقة مكلسة مبردة لانتزاع القليل من الثقافة ونقلها إلى أنبوب الاختبار الثاني قم بطحنه في وسط سائل على جدار أنبوب الاختبار ثم اغسله بالوسط.

عند البذر وإعادة البذر، ينبغي إيلاء الاهتمام للامتثال لقواعد العقم، حتى لا تلوث محاصيلك بالنباتات الدقيقة الأجنبية، وكذلك عدم تلويث البيئة. يتم وضع العلامات على الأنابيب ووضعها في منظم الحرارة للحضانة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية يوميًا.

خاتمة

المحاسبة عن النتائج. خاتمة الدراسة. يتم أخذ نتائج التحديد في الاعتبار، واستنادًا إلى مجمل البيانات التي تم الحصول عليها، واستنادًا إلى تصنيف وخصائص السلالات النموذجية الموصوفة في الدليل (مفتاح بورغي، 1994-1996)، يتم تحديد نوع المحاصيل المعزولة.

"

تتضمن طريقة البحث الثقافي عزل نوع معين من البكتيريا من وسط غذائي عن طريق الزراعة، مع تحديد نوعها لاحقًا. ويتم تحديد نوع البكتيريا مع الأخذ بعين الاعتبار بنيتها وبياناتها الثقافية والبيئية، فضلا عن المؤشرات الجينية والكيميائية الحيوية والبيولوجية.

تسمى الأنواع الجديدة من البكتيريا المعزولة من وسط غذائي، والتي لم يتم تحديد خصائصها بعد، بالثقافة النقية. وبمجرد تحديد خصائصها أخيرًا، تُسمى البكتيريا المعزولة من مكان وزمان محددين بسلالة. في هذه الحالة، يُسمح بوجود اختلافات طفيفة في خصائص أو مكان أو وقت عزل سلالة من نوع واحد.

المرحلة 1

أ) الأنشطة التحضيرية. تشمل هذه المرحلة جمع المواد وتخزينها ونقلها. وأيضًا، إذا لزم الأمر، يمكن معالجتها اعتمادًا على خصائص البكتيريا قيد الدراسة. على سبيل المثال، عند فحص المواد بحثًا عن مرض السل، يتم استخدام المحاليل القلوية أو الحمضية لتحديد البكتيريا الدقيقة المقاومة للأحماض.

ب) التخصيب. هذه المرحلة ليست إلزامية ويتم تنفيذها إذا كان عدد البكتيريا في مادة الاختبار غير كاف لإجراء دراسة كاملة. على سبيل المثال، عند عزل مزرعة الدم، يتم وضع الدم الذي يتم اختباره في وسط بنسبة 1 إلى 10 ويتم تخزينه لمدة 24 ساعة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية.

في) الفحص المجهري. يتم تلوين مسحة من المادة التي يتم فحصها وفحصها تحت المجهر - ويتم فحص النباتات الدقيقة وخصائصها وكميتها. في المستقبل، من الضروري عزل جميع الكائنات الحية الدقيقة الموجودة فيه بشكل منفصل عن اللطاخة الأولية.

ز) إنشاء مستعمرات منفصلة. يتم تطبيق المادة على كوب يحتوي على وسط انتقائي خاص، ويتم استخدام حلقة أو ملعقة لهذا الغرض. بعد ذلك، ضع الكوب مقلوبًا لحماية المستعمرات من التكثيف، وقم بتخزينه في منظم الحرارة لمدة 20 ساعة تقريبًا، مع الحفاظ على درجة حرارة 37 درجة مئوية.

مهم!يجب أن نتذكر أنه أثناء عملية البحث من الضروري الالتزام بقواعد العزلة. من ناحية، لحماية المواد التي تتم دراستها وإزالة البكتيريا، ومن ناحية أخرى، لمنع إصابة الأشخاص المحيطين والبيئة الخارجية بالعدوى.

أما بالنسبة للكائنات الحية الدقيقة الانتهازية، عند إزالتها، فإن خصائصها الكمية مهمة. في هذه الحالة، يتم إجراء البذر الكمي، حيث يتم إجراء عدة مئات من التخفيفات للمادة في محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر. بعد ذلك، يتم إجراء التلقيح في أطباق بتري سعة 50 ميكرولتر.

المرحلة 2

أ) دراسة الخصائص المورفولوجية للمستعمرات في الوسط وفحصها المجهري. يتم فحص الأكواب وملاحظة خصائص الكائنات الحية الدقيقة وأعدادها ومعدلات نموها وملاحظة الوسط الغذائي الأنسب. للدراسة، من الأفضل اختيار المستعمرات الموجودة بالقرب من المركز، وإذا تم تشكيل عدة أنواع من الثقافات النقية، فقم بدراسة كل منها على حدة. لدراسة النقاء الشكلي للثقافة، يتم استخدام مسحة من المستعمرة، ويتم صبغها (عادةً ما يتم استخدام طريقة جرام أو أي طريقة أخرى) ويتم فحصها بعناية تحت المجهر.

ب) تراكم الثقافة النقية. للقيام بذلك، يتم وضع مستعمرات جميع الأشكال المورفولوجية في أنابيب اختبار منفصلة مع وسط مغذٍ ويتم الاحتفاظ بها في منظم الحرارة عند درجة حرارة معينة (بالنسبة لمعظم الكائنات الحية الدقيقة، تكون درجة الحرارة 37 درجة مئوية مناسبة، ولكن في بعض الحالات قد تكون مختلفة).

غالبًا ما يكون الوسط الغذائي للتراكم هو وسط كليجلر. وله مظهر "مشطوف" في أنابيب الاختبار، حيث يكون ثلثا جزئه على شكل عمود، وثلثه سطح مشطوف، ملون باللون الأحمر الفاتح. مُجَمَّع:

· 0.1% جلوكوز.

· 1% لاكتوز.

· كاشف خاص لكبريتيد الهيدروجين.

· مؤشر الفينول الأحمر.

المرحلة 3

أ) مستوى النمو ونقاء الثقافة. بشكل عام، يكون للثقافة النقية الناتجة نمو موحد، وعند الفحص المجهري، يكون للخلايا نفس البنية المورفولوجية والصبغية. ولكن هناك بعض أنواع البكتيريا ذات التعدد الواضح، وهناك خلايا ذات هياكل مورفولوجية مختلفة.

وإذا تم استخدام وسط كليجلر كوسيط غذائي فإن الخواص البيوكيميائية تتحدد بتغير لون العمود والجزء المائل. على سبيل المثال، إذا تحلل اللاكتوز، يتحول الجزء المشطوف إلى اللون الأصفر، وإذا تحلل الجلوكوز، يتحول العمود إلى اللون الأصفر؛ عند إنتاج كبريتيد الهيدروجين، يحدث السواد بسبب تحول الكبريتات إلى كبريتيد الحديد.

كما ترون في الشكل، يميل وسط كليجلر إلى تغيير لونه. ويرجع ذلك إلى حقيقة أن تحلل المواد النيتروجينية بواسطة البكتيريا وتكوين المنتجات القلوية يحدث بشكل غير متجانس في العمود (الظروف اللاهوائية) وعلى السطح المشطوف (الظروف الهوائية).

في البيئة الهوائية (السطح المائل)، لوحظ تكوين أكثر نشاطًا للقلويات مقارنة بالبيئة اللاهوائية (العمود). لذلك، عندما يحدث تحلل الجلوكوز، يتم تحييد الحمض الموجود على السطح المائل بسهولة. ولكن، أثناء تحلل اللاكتوز، تركيزه أعلى بكثير، لا يمكن تحييد الحمض.

أما بالنسبة للبيئة اللاهوائية، يتم إنتاج عدد قليل جدًا من المنتجات القلوية، لذلك يمكنك هنا ملاحظة كيفية تخمير الجلوكوز.

الإشريكية القولونية –يعزز تحلل الجلوكوز واللاكتوز مع تكوين الغازات، ولا ينتج الهيدروجين . يسبب اصفرار الوسط بأكمله مع وجود فواصل.

نظيرة التيفية –يعزز تحلل الجلوكوز مع تكوين الغازات السلبية اللاكتوز. الجزء المشطوف لا يتغير لونه، ويتحول العمود إلى اللون الأصفر.

S. نظيرة التيفية أ-لا ينتج كبريتيد الهيدروجين.

S. نظيرة التيفية ب –يتم إنتاج كبريتيد الهيدروجين (يظهر لون أسود مع تقدم عملية الحقن).

التيفية –يتحلل الجلوكوز دون تكوين غاز، وينتج كبريتيد الهيدروجين، سلبي اللاكتوز. الجزء المشطوف لا يتغير لونه، ويتحول العمود إلى اللون الأصفر ويتحول الوسط إلى اللون الأسود مع تقدم عملية الحقن.

الشيغيلة spp.-اللاكتوز سلبي، الجلوكوز إيجابي، لا يتم إنتاج كبريتيد الهيدروجين. يأخذ العمود لونًا أصفر، لكن الجزء المشطوف يظل كما هو.

ب) التحديد النهائي للثقافة النقية واستجابتها للمضادات الحيوية. في هذه المرحلة يتم دراسة الخصائص البيوكيميائية والبيولوجية والمصلية والوراثية للثقافة.

في الممارسة البحثية ليست هناك حاجة لدراسة النطاق الكامل لخصائص الكائنات الحية الدقيقة. ويكفي استخدام أبسط الاختبارات لتحديد ما إذا كانت الكائنات الحية الدقيقة تنتمي إلى نوع معين.

يعد تشخيص الأمراض المعدية ضروريًا للتنفيذ اللاحق للعلاج المناسب للسبب الذي يهدف إلى تدمير العامل المسبب للعملية المرضية. يتم اكتشاف وتحديد الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض باستخدام تقنيات التشخيص المختبرية المختلفة، واحدة منها هي الاختبارات البكتريولوجية.

علم البكتيريا كعلم تطور في التاسع عشر القرن بفضل إدخال تقنيات البحث البكتريولوجي.

مبدأ وجوهر هذه التقنية

الهدف الرئيسي للبحث البكتريولوجي هو الكشف والتعرف اللاحق على الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض (المسببة للمرض) في المادة قيد الدراسة. للقيام بذلك، يتم إجراء التلقيح على وسائط مغذية خاصة (مرق الببتون اللحوم، وسط أجار صلب)، والتي، في وجود مسببات الأمراض في المادة، تنمو مستعمرات الكائنات الحية الدقيقة بعد مرور بعض الوقت. يتم التعرف عليها بواسطة المجهر (حجم الخلية، شكلها، لون معين عند صبغها حسب الجرام)، أو الكيمياء الحيوية (القدرة على تحطيم بعض الكربوهيدرات أو
البروتينات) والخصائص المستضدية (التفاعل مع الأجسام المضادة للفئات الرئيسية من مسببات الأمراض). بشكل عام، تتطلب تقنية التشخيص هذه من 48 إلى 72 ساعة، وهي فترة طويلة جدًا (خاصة إذا كان من الضروري البدء بسرعة في العلاج الموجه للسبب للأمراض المعدية). ومع ذلك، فإن هذا النوع من التشخيص المختبري لا يفقد أهميته اليوم، لأنه يمكن الاعتماد عليه لعدد كبير من الأمراض المعدية.

في كثير من الأحيان، أثناء الدراسة البكتريولوجية، يتم تحديد حساسية الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض المعزولة للمجموعات الرئيسية من المضادات الحيوية الحديثة. وهذا يجعل من الممكن لاحقًا اختيار العلاج الأكثر فعالية للسبب.

متى يتم إجراء التشخيص البكتريولوجي؟

إن مؤشر إجراء الدراسة البكتيرية هو تشخيص الأمراض المعدية المختلفة والتي تشمل:

أيضًا، يمكن استخدام هذه التقنية لتحديد العامل المسبب للعمليات القيحية ذات التعريبات المختلفة. بادئ ذي بدء، من الضروري تحديد حساسية الكائنات الحية الدقيقة المحددة للمضادات الحيوية، لأنه مع تطور عملية قيحية، غالبا ما تكون مسببات الأمراض مقاومة لمعظم المضادات الحيوية.

تشخيص دسباقتريوز باستخدام الفحص البكتريولوجي يجعل من الممكن تحديد نوع الكائنات الحية الدقيقة الانتهازية، فضلا عن كميتها، وعلى أساسها يتم التوصل إلى استنتاج حول شدة اضطراب البكتيريا الطبيعية.

المواد المستخدمة للفحص البكتريولوجي هي البول، الدم، مسحات من تجويف الأنف، مجرى البول، المهبل، المستقيم، البراز، الحيوانات المنوية لدى الرجال، البلغم. يعتمد اختيار المادة على مؤشرات طريقة التشخيص المختبري وتوطين العملية المرضية.

فك تشفير النتائج

في معظم الحالات، تعتمد نتيجة الدراسة على مؤشرين - حقيقة وجود ما يمكن اكتشافه
الكائنات الحية الدقيقة (نتيجة إيجابية أو سلبية)، وكذلك عدد الخلايا البكتيرية لكل وحدة حجم مادة الاختبار (يحدث هذا المؤشر فقط بنتيجة إيجابية). يتم التعبير عن الوفرة البكتيرية بعدد وحدات تشكيل المستعمرة (CFU). وكلما ارتفع هذا المؤشر، زاد عدد البكتيريا في مادة الاختبار. قد تتضمن النتيجة أيضًا مؤشرات على حساسية الكائنات الحية الدقيقة المحددة للمضادات الحيوية. ويتكون عادةً من قائمة الفئات الرئيسية للعوامل المضادة للبكتيريا (