تطور معظم حالات العدوى الفيروسية استجابات مناعية تستخدم في التشخيص. عادة ما يتم تقييم الاستجابات الخلوية في اختبارات السمية الخلوية للخلايا الليمفاوية ضد العوامل المعدية أو الخلايا المستهدفة المصابة بها، أو يتم تحديد قدرة الخلايا الليمفاوية على الاستجابة لمختلف المستضدات والمخففات.

في المختبرات العملية، نادرا ما يتم تحديد شدة التفاعلات الخلوية. أصبحت طرق تحديد المضادات الحيوية المضادة للفيروسات أكثر انتشارًا.

RN يعتمد على قمع التأثير المرضي للخلايا بعد خلط الفيروس بـ AT محدد. يتم خلط الفيروس غير المعروف مع الأمصال التجارية المعروفة، وبعد الحضانة المناسبة، يتم إضافته إلى الطبقة الأحادية للخلية. يشير غياب موت الخلايا إلى وجود تناقض بين العامل المعدي والـ ATs المعروفة.

تثبيط التراص الدموي بواسطة RTHA يستخدم لتحديد الفيروسات التي يمكنها تجميع خلايا الدم الحمراء المختلفة. للقيام بذلك، قم بخلط وسط الثقافة الذي يحتوي على العامل الممرض مع مصل مضاد تجاري معروف وإضافته إلى ثقافة الخلية. بعد الحضانة، يتم تحديد قدرة المزرعة على التراص الدموي، وفي حالة غيابها، يتم التوصل إلى استنتاج مفاده أن الفيروس لا يتطابق مع المصل المضاد. تثبيط تأثير الاعتلال الخلوي عن طريق تداخل الفيروس يتم استخدام تفاعل تثبيط تأثير الاعتلال الخلوي بسبب تداخل الفيروس لتحديد العامل الممرض الذي يتداخل مع فيروس معروف مسبب للاعتلال الخلوي في مزرعة الخلايا الحساسة. للقيام بذلك، تتم إضافة المصل التجاري إلى وسط الاستزراع الذي يحتوي على الفيروس قيد الدراسة (على سبيل المثال، إلى فيروس الحصبة الألمانية إذا كان مشتبهًا به)، ويتم احتضانه ثم إصابة مزرعة ثانية؛ بعد 1-2 أيام، يتم إدخال فيروس معروف للخلايا (على سبيل المثال، أي فيروس ECHO). في حالة وجود تأثير ممرض للخلايا، يتم استنتاج أن المزرعة الأولى كانت مصابة بفيروس يتوافق مع AT المستخدم.

التألق المناعي المباشر.

من بين الاختبارات الأخرى، الأكثر استخدامًا هو تفاعل التألق المناعي المباشر (الأسرع والأكثر حساسية وقابلية للتكرار). على سبيل المثال، يتطلب تحديد الفيروس المضخم للخلايا (CMV) عن طريق التأثير المرضي للخلايا ما لا يقل عن 2-3 أسابيع، وعند استخدام AT وحيدة النسيلة، يكون تحديد الهوية ممكنًا في غضون 24 ساعة. وبوجود مجموعة من هذه الكواشف، يمكن إضافتها إلى الثقافات المصابة بالفيروس، المحتضنة ، وغسل الكاشف غير المرتبط وفحصه باستخدام المجهر الفلوري (يسمح لك باكتشاف وجود الفلورة في الخلايا المصابة).

المجهر الإلكتروني المناعي (مماثلة للطريقة السابقة) تسمح لك بتحديد أنواع مختلفة من الفيروسات التي تم تحديدها بواسطة المجهر الإلكتروني (على سبيل المثال، أنواع مختلفة من فيروسات الهربس)، والتي لا يمكن القيام بها بناءً على السمات المورفولوجية. وبدلاً من الأمصال المضادة، يتم استخدام ATs الموسومة بطرق مختلفة لتحديد الهوية، لكن تعقيد الطريقة وتكلفتها العالية يحدان من استخدامها.

الكشف عن الأجسام المضادة للفيروسات (AT) في مصل الدم. RTGA. RSK. الشعاب المرجانية.

طرق الامتصاص المناعي للكشف عن الأجسام المضادة للفيروسات.

هناك طريقة أبسط وأكثر سهولة وهي اكتشاف الأجسام المضادة للفيروسات (AT) في المصل. يجب جمع عينات الدم مرتين: مباشرة بعد ظهور العلامات السريرية وبعد 2 إلى 3 أسابيع. من المهم للغاية فحص عينتين من المصل بالضبط. لا يمكن اعتبار نتائج دراسة واحدة قاطعة بسبب عدم القدرة على ربط حدوث AT بالحالة الحالية. من الممكن أن تنتشر هذه الـ ATs بعد الإصابة السابقة. في مثل هذه الحالة، لا يمكن المبالغة في تقدير دور دراسة المصل الذي تم الحصول عليه خلال فترة النقاهة. تتم الإشارة إلى وجود المرض خلال فترة جمع العينة الأولى من خلال زيادة لا تقل عن أربعة أضعاف في عيار AT، والتي تم اكتشافها أثناء دراسة العينة الثانية.

لا تفرق الطرق المذكورة أدناه بين الأجسام المضادة (AT) التي تكونت أثناء المرض وتلك المنتشرة بعد الشفاء (تختلف مدة هذه الفترة باختلاف أنواع العدوى). نظرًا لأنه من أجل التشخيص المناسب، من الضروري تأكيد زيادة كبيرة في عيار AT في عينتين، يتم فحص العينة الأولى في المرحلة الحادة، والثانية خلال فترة الشفاء (بعد 2-3 أسابيع). النتائج التي تم الحصول عليها هي بطبيعتها بأثر رجعي وهي أكثر ملاءمة لإجراء المسوحات الوبائية. يكتشف RTGA AT المُصنَّع ضد الراصة الدموية في الفيروسات (على سبيل المثال، فيروس الأنفلونزا).

تتيح هذه الطريقة اكتشاف هذه الأجسام المضادة (AT) بسهولة في مصل المريض. RSK هي الطريقة الرئيسية للتشخيص المصلي للعدوى الفيروسية (من بين تلك المتاحة). يكشف التفاعل عن IgM وIgG المثبتين للتكملة، لكنه لا يفرق بينهما؛ لتحسين النتائج التي تم الحصول عليها، يتطلب تنظيم التفاعل مهارات شخصية معينة.

الشعاب المرجانية. إذا كان من الممكن الحصول على خزعة من الأنسجة المصابة وتوافر مجموعات AT التجارية الموسومة بالفلورسين، فيمكن تأكيد التشخيص عن طريق التألق المناعي المباشر.

يتضمن التفاعل احتضان الأنسجة قيد الدراسة باستخدام AT، وإزالتها لاحقًا، وإجراء الفحص المجهري الفلوري للعينة. تعتبر طرق الامتصاص المناعي للكشف عن الأجسام المضادة للفيروسات طرق الامتصاص المناعي (على سبيل المثال، ELISA و RIA) أكثر إفادة لأنها تكتشف IgM و IgG بشكل منفصل، مما يسمح للمرء باستخلاص استنتاجات معينة حول ديناميكيات العملية المعدية أو حالة النقاهة. للكشف عن AT، يتم امتصاص مستضد معروف على ركيزة صلبة (على سبيل المثال، على جدران أنابيب الاختبار، والألواح البلاستيكية الدقيقة، وأطباق بيتري) ويتم إضافة التخفيفات المختلفة لمصل المريض. بعد الحضانة المناسبة، تتم إزالة AT غير المرتبط، ويضاف المصل المضاد للـ Ig البشري الموسوم بإنزيم، ويتم تكرار إجراء الحضانة والغسل للـ AT غير المرتبط، وتضاف بعض الركيزة الملونة (الحساسة لعمل الإنزيم). نظرًا لأن تغير اللون يتناسب مع محتوى AT معين، فمن الممكن تمامًا تحديد عيارها باستخدام القياس الطيفي. الطريقة الأكثر استخدامًا في تشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية هي التطعيم المناعي.

الكشف عن المستضدات الفيروسية (AGs). إليسا. حاليًا، ظهرت بالفعل مجموعات تجارية لتحديد ارتفاع ضغط الدم لدى بعض مسببات الأمراض، مما يسمح بالتعرف عليها في غضون 5-10 دقائق. للكشف عن AG، يتم امتصاص ATs المعروفة في الطور الصلب ويضاف المصل الذي يحتوي على AG؛ بعد الحضانة، يتم صب AG غير المرتبط، ويتم غسل النظام ووضع علامة عليه AT، الخاصة بـ AT الممتص، ويتم إضافته. يتم تكرار إجراء الحضانة والغسيل، ويتم إضافة الركيزة الملونة، ويتم تسجيل نتيجة إيجابية عندما يتغير لون النظام. يعد تهجين الحمض النووي طريقة محددة للغاية تسمح بتحديد الجينوم الفيروسي بعد تهجينه مع جزيئات الحمض النووي التكميلية. تستخدم الإنزيمات والنظائر كعلامات.

تحدد الطريقة قدرة الحمض النووي الفيروسي على التهجين مع الحمض النووي التكميلي المسمى؛ تتناسب خصوصية الطريقة بشكل مباشر مع طول السلسلة التكميلية. تعتبر طريقة التهجين الموضعي للأحماض النووية واعدة. لإعداد التفاعل، يتم تطبيق الحمض النووي المسمى على خزعات الأنسجة (بما في ذلك تلك المثبتة في الفورمالين أو المضمنة في كتل البارافين) ويتم تسجيل التفاعل مع الحمض النووي التكميلي. يتم استخدام هذه الطريقة للكشف عن فيروسات الهربس البسيط، والورم الحليمي البشري، وإبشتاين-بار، وما إلى ذلك.

تفاعل البوليميراز المتسلسل. تعمل هذه الطريقة على زيادة حساسية طريقة التهجين بشكل كبير، مما يزيد من محتوى الحمض النووي الفيروسي في المادة التي يتم الحصول عليها من المريض، ويسرع أيضًا وقت الحصول على النتائج.

يعتمد على تحديد الأجسام المضادة للفيروسات في دم المريض في التفاعلات المصلية باستخدام مستضدات فيروسية محددة - أدوات تشخيصية أو أنظمة اختبار خاصة. يتم إجراء التفاعلات المصلية للعدوى الفيروسية في وسط سائل (RSK، RTGA، RNGA، RONGA، RTONGA، RIA)، في هلام (RPG، RRG، RVIEF) أو على حامل الطور الصلب (على سبيل المثال، على جدران لوحة من البوليسترين تحتوي جيدًا على أحد مكونات الاستجابة المناعية - المستضد أو الجسم المضاد). تُعرف طرق الطور الصلب هذه باسم ELISA، وIEM، وRGadsTO، وRIF، وRGads، وRTGads.

في كثير من الأحيان، وبسبب وجود الأجسام المضادة الطبيعية المضادة للفيروسات في دم معظم الأشخاص الأصحاء، يعتمد التشخيص المصلي للعدوى الفيروسية على الدراسة الأمصال المقترنة,تؤخذ في بداية المرض وفي ذروة المرض أو خلال فترة النقاهة من أجل تحديد الزيادة في عيار الأجسام المضادة. تعتبر الزيادة في عيار الأجسام المضادة أربع مرات أو أكثر ذات أهمية تشخيصية.

يتم تحقيق زيادة حساسية الطرق المصلية عن طريق امتصاص المستضدات أو الأجسام المضادة على كريات الدم الحمراء (RNGA، RONGA، RTONGA، RGadsTO، RRG)، ووضع العلامات باستخدام الإنزيمات (ELISA)، أو النظائر المشعة (RIA، RPG) أو مبدأ الفلوروكروم (RIF). يتم أيضًا استخدام تحلل كريات الدم الحمراء (كمؤشر) أثناء تفاعل المستضدات والأجسام المضادة في وجود المكمل (RSK، RRG).

تفاعل التثبيت المكمل (CFR)في شكل بديل للتثبيت التكميلي في البرد (بين عشية وضحاها عند درجة حرارة +4 درجة مئوية) غالبًا ما يستخدم في علم الفيروسات للتشخيص بأثر رجعي لعدد من الالتهابات الفيروسية ولتحديد المستضدات الخاصة بالفيروسات في المواد من مرضى.

تفاعل انحلال الدم الشعاعي (RHR)يعتمد هلام الاغاروز على ظاهرة انحلال الدم في كريات الدم الحمراء المتحسسة بواسطة المستضد تحت تأثير الأجسام المضادة الخاصة بالفيروس في وجود مكمل ويستخدم في التشخيص المصلي للأنفلونزا، والسارس، والحصبة الألمانية، والنكاف، وعدوى فيروس التوغا.

لإعداد التفاعل، يضاف 0.1 مل من المستضد الفيروسي غير المخفف إلى كريات الدم الحمراء في الأغنام (0.3 مل من معلق 10٪) ويحفظ الخليط لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. تتم إضافة 0.3 مل من كريات الدم الحمراء المحسسة و0.1 مل من المكمل إلى 1.2% من الأغاروز عند درجة حرارة 42 درجة مئوية، ويسكب الخليط على شرائح زجاجية أو في فتحات ألواح البوليسترين، ويتم قطع الثقوب في هلام الأغاروز المتصلب باستخدام لكمة ومليئة بمصل التحكم. يتم تغطية الزجاج أو الألواح بغطاء ووضعها في غرفة رطبة لمدة 16-18 ساعة في منظم الحرارة. يتم قياس التفاعل بقطر منطقة انحلال الدم حول الثقوب المملوءة بالمصل. لا يوجد انحلال الدم في السيطرة.

المستضدات- المواد الأجنبية وراثيا التي عند دخولها إلى جسم الحيوان أو الإنسان تسبب استجابة مناعية محددة - تخليق الأجسام المضادة، وتكوين الخلايا الليمفاوية التائية الحساسة، والذاكرة المناعية أو التحمل. تشير المواد الأجنبية إلى هياكل كيميائية غير موجودة في الجسم. تعتبر الفيروسات والكائنات الحية الدقيقة وكذلك الخلايا والأنسجة وأعضاء الحيوانات والأشخاص الآخرين غريبة على جسم الإنسان. تحتوي المستضدات على العديد من المستقبلات للتواصل مع الأجسام المضادة وتكون قادرة على التفاعل معها سواء في جسم الحيوان أو الإنسان (في الجسم الحي)، أو خارج الجسم - في المختبر (في المختبر).

الأجسام المضادة- البروتينات ذات الوزن الجزيئي العالي لجزء الجلوبيولين في مصل الدم. يتم تصنيع الأجسام المضادة تحت تأثير المستضد وتكون قادرة على التفاعل (الدمج) على وجه التحديد مع المستضد المقابل. جميع الأجسام المضادة لها البنية المميزة للجلوبيولين المناعي. تختلف في الخصائص المناعية والبيولوجية والفيزيائية. وتنقسم إلى 5 فئات - IgG وIgA وIgM وIgD وIgE.

التفاعلات المصلية

في الممارسة المختبرية يستخدمون ردود الفعل المصلية- التفاعلات المخبرية بين المستضدات والأجسام المضادة التي تؤدي إلى تغيرات يمكن اكتشافها في النظام قيد الدراسة. تسمى هذه التفاعلات مصلية، حيث يتم إجراؤها باستخدام مصل (مصل) يحتوي على أجسام مضادة.

تعتبر الاختبارات المصلية التي يتم إجراؤها للكشف عن أجسام مضادة معينة ومستضدات مسببات الأمراض في الأمراض المعدية من طرق التشخيص المختبري التي يسهل الوصول إليها أكثر من الكشف البكتريولوجي لمسببات الأمراض. وفي بعض الحالات، تظل الاختبارات المصلية هي الطريقة الوحيدة لتشخيص الأمراض المعدية.

بعض طرق تحديد الأجسام المضادة المستخدمة في الممارسة المخبرية

تعتمد جميع التفاعلات المصلية على تفاعل المستضد والجسم المضاد مع تكوين المجمعات المناعية، والتي يمكن اكتشافها في الاختبارات المختبرية (أي "في المختبر" - خارج الكائن الحي). يمكن أن تكون تفاعلات الأجسام المضادة للمستضد في النظام المختبري مصحوبة بحدوث العديد من الظواهر - التراص، والترسيب، والتحلل وغيرها. تعتمد المظاهر الخارجية للتفاعل على الخواص الفيزيائية والكيميائية للمستضد (حجم الجسيمات، الحالة الفيزيائية)، فئة ونوع الأجسام المضادة، وكذلك الظروف التجريبية (الاتساق المتوسط، تركيز الملح، الرقم الهيدروجيني، درجة الحرارة).

1. رد فعل التثبيت المكمل

إطراءهو نظام من بروتينات بلازما الدم، يتضمن 9 مكونات يشار إليها بالحرف C (C1، C2، C3،...C9)، العامل B، العامل D وعدد من البروتينات التنظيمية. وتتكون بعض هذه المكونات من 2 - 3 بروتينات، على سبيل المثال C1 عبارة عن مركب من ثلاثة بروتينات. تدور هذه البروتينات في مجرى الدم وتوجد على أغشية الخلايا. المكمل هو النظام الأكثر أهمية لكل من المناعة الفطرية والمكتسبة. تم تصميم هذا النظام لحماية الجسم من عمل العوامل الأجنبية ويشارك في تنفيذ الاستجابة المناعية للجسم. تم اكتشاف المكمل في نهاية القرن التاسع عشر على يد العالم البلجيكي ج. بورديت.

تفاعل التثبيت المكمل (CFR)– تفاعل مصلي يستخدم للتحديد الكمي للأجسام المضادة والمستضدات المثبتة للتكملة. تم وصفه لأول مرة من قبل بورديت وجينجو في عام 1901. يعتمد RSC على حقيقة أن مركب المستضد والجسم المضاد قادر على امتصاص المكمل الذي يضاف إلى خليط التفاعل. عندما تتوافق المستضدات والأجسام المضادة مع بعضها البعض، فإنها تشكل مجمعًا مناعيًا يرتبط به المكمل. مركب مناعي محدد يمتص المكملات المضافة إلى النظام، أي. يرتبط المكمل بمركب الأجسام المضادة للمستضد. كلما زاد عدد الأجسام المضادة، زاد عدد المكملات الثابتة. إذا لم يتم تكوين مركب المستضد والجسم المضاد، فإن المكمل يبقى حرًا.

تعقيد RSC هو أن تفاعل تكوين مجمع تكملة المستضد والجسم المضاد غير مرئي. لتحديد مكونات التفاعل، يتم استخدام نظام مؤشر انحلالي إضافي. باستخدام تفاعل انحلال الدم، يتم إجراء تحديد كمي لبقايا المكمل بعد نهاية تفاعل المستضد مع المصل المضاد.

يتم استخدام تفاعل التثبيت التكميلي (CFR) للكشف عن الأجسام المضادة لمستضد معين أو تحديد نوع المستضد باستخدام جسم مضاد معروف. يتضمن هذا التفاعل المصلي المعقد نظامين ومكملين. النظام الأول بكتريولوجي (أساسي)، ويتكون من مستضد وجسم مضاد. النظام الثاني هو الانحلالي (المؤشر). ويشمل خلايا الدم الحمراء للأغنام (المستضد) والمصل الانحلالي المقابل (الجسم المضاد).

يتم إعطاء RSC على خطوتين: أولاً، يتم دمج المستضد مع مصل دم الاختبار، حيث يتم البحث عن الأجسام المضادة، ثم تتم إضافة المكمل. إذا تطابق المستضد والجسم المضاد مع بعضهما البعض، يتم تشكيل مركب مناعي يربط المتممة. في غياب الأجسام المضادة في المصل، لا يتشكل المجمع المناعي ويبقى المكمل حرا. نظرًا لأن عملية الامتزاز التكميلي بواسطة المجمع تكون غير مرئية بصريًا، تتم إضافة نظام الهيم لتحديد هذه العملية.

نظرًا لحساسيته العالية، يُستخدم تفاعل التثبيت التكميلي (FFR) في التشخيص المصلي للعدوى البكتيرية والفيروسية، وحالات الحساسية، وللتعرف على المستضدات (الثقافة البكتيرية المعزولة).

تفاعل الهطول (RP)(من اللاتينية praecipitatio - هطول الأمطار، السقوط) يعتمد على ترسيب مركب مناعي محدد يتكون من مستضد قابل للذوبان وجسم مضاد محدد في وجود المنحل بالكهرباء. نتيجة للتفاعل، يتم تشكيل حلقة غائمة أو رواسب فضفاضة - راسب. يحدث تفاعل ترسيب بين مستضد قابل للذوبان في الماء وجسم مضاد، مما يؤدي إلى تكوين مجمعات كبيرة تترسب

3. رد فعل التلبد

رد فعل التلبد (حسب رامون)(من اللاتينية الندف - رقائق الصوف، الندف - قطع صغيرة، رقائق؛ التلبد - تكوين مجاميع ندفية فضفاضة (ندف) من جزيئات صغيرة من الطور المشتت) - ظهور بريق أو كتلة ندفية (هطول مناعي) في أنبوب اختبار أثناء رد فعل السم - مضاد السموم أو ذوفان - مضاد السموم. يتم استخدامه لتحديد نشاط المصل المضاد للسموم أو التوكسويد.

يعتمد تفاعل التلبد على اكتشاف التلبد "الأولي" - التعكر أثناء تكوين السموم الخارجية (الأناتوكسين) + مركب مضاد السموم في النسب الكمية المثالية للمكونات.

4. رد فعل التراص

التراص(من اللاتينية agglutinatio - الإلتصاق) هو تفاعل التفاعل بين مستضد وجسم مضاد محدد، والذي يتجلى في شكل الإلتصاق. في هذه الحالة، يتم لصق المستضدات على شكل جسيمات جسيمية (الخلايا الميكروبية، وخلايا الدم الحمراء، وما إلى ذلك) معًا بواسطة الأجسام المضادة وتترسب (تتراص) على شكل رقائق. عادة ما تكون المواد الملتصقة مرئية للعين المجردة. لكي يحدث التفاعل، من الضروري وجود إلكتروليتات (على سبيل المثال، محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر)، مما يؤدي إلى تسريع عملية التراص.

باستخدام تفاعل التراص (RA)، يتم اكتشاف الأجسام المضادة أو المستضدات الجسيمية (اختبار التراص الإنجليزي). اعتمادًا على نوع التشخيص المناعي المستخدم، يتم تمييز تفاعلات التراص الميكروبي، والتراص الدموي، والتراص اللاتيكسي، والتخثر، وما إلى ذلك.

5. اسم الأجسام المضادة المشاركة في تفاعلات الترسيب

تتم تسمية الأجسام المضادة المشاركة في تفاعلات الترسيب تقليديًا على اسم تفاعلها مع المستضد:

الراصات - تسبب التصاق المستضد الجسيمي - الراصات وترسيب المستضد - مجمع الأجسام المضادة (التراص) ؛

الترسبات - تشكل راسبًا مع مستضد قابل للذوبان - الترسيبتينوجين.

تشارك البكتريوليزينات (التي تسبب تحلل البكتيريا) والهيموليزينات (التي تسبب تحلل خلايا الدم الحمراء) في تفاعلات التحلل.

11621 0

يتم تحديد التفاعلات المصلية وفقًا للظواهر المصاحبة لتكوين مجمع الأجسام المضادة للمستضد أثناء تفاعل المكونات ذات الخصائص المختلفة. هناك تفاعلات التراص والترسيب والتحلل.

تفاعل التراص (RA)

يعتمد تفاعل التراص (RA) على استخدام مستضد جسيمي (معلق من البكتيريا، وكريات الدم الحمراء الحساسة، وجزيئات اللاتكس، وما إلى ذلك) يتفاعل مع أجسام مضادة محددة، ونتيجة لذلك يترسب مركب المستضد والجسم المضاد الناتج. يستخدم هذا التفاعل على نطاق واسع في الممارسة المختبرية للتشخيص المصلي للعدوى البكتيرية وللتعرف على الكائنات الحية الدقيقة المعزولة.

يستخدم RA لتشخيص العديد من الأمراض المعدية: داء البروسيلات (تفاعل رايت، هيدلسون)، التوليميا، داء البريميات (RAL - تراص وتفاعل تحلل الليستريات)، داء الليستريات، التيفوس (RAR - تفاعل تراص الريكتسيا)، داء الشيغيلات، داء اليرسينيات، السل الكاذب، إلخ.

تفاعل التراص غير المباشر أو السلبي (RIGA أو RPGA).

لمرحلة هذا التفاعل، يتم استخدام خلايا الدم الحمراء للحيوانات (الأغنام، القرود، الخنازير الغينية، بعض الطيور) المتحسسة بالأجسام المضادة أو المستضد، ويتم ذلك عن طريق احتضان معلق من خلايا الدم الحمراء ومحلول المستضد أو المصل المناعي.

تسمى التشخيصات التي يتم الحصول عليها على أساس كريات الدم الحمراء الحساسة للمستضدات تشخيص مستضد كريات الدم الحمراء. وهي مخصصة لتحديد الأجسام المضادة في التخفيفات التسلسلية لأمصال الدم، على سبيل المثال، تشخيص الشيجيلا بكريات الدم الحمراء، وتشخيص السالمونيلا بكريات الدم الحمراء.

وفقا لذلك، يتم استدعاء التشخيص على أساس كريات الدم الحمراء الحساسة للجلوبيولين المناعي المحدد الأجسام المضادة(الجلوبيولين المناعي) التشخيصوهي تعمل على اكتشاف المستضدات في مواد مختلفة، على سبيل المثال، الجلوبيولين المناعي لتشخيص الخناق في كريات الدم الحمراء لـ RIGA، المستخدم للكشف عن ذيفان الخناق الخارجي للبكتيريا الوتدية في وسط مغذي سائل عندما يتم تلقيح مادة من الأنف والبلعوم الفموي فيه.

يتم استخدام تفاعل التراص الدموي لتشخيص كل من العدوى البكتيرية (حمى التيفوئيد، وحمى نظيرة التيفية، والزحار، وداء البروسيلات، والطاعون، والكوليرا، وما إلى ذلك) والعدوى الفيروسية (الأنفلونزا، والتهابات الفيروسة الغدانية، والحصبة، وما إلى ذلك). من حيث الحساسية والنوعية، فإن RIGA متفوق على RA.

تفاعل تثبيط التراص الدموي (HAI)

يستخدم تفاعل تثبيط التراص الدموي (HAI) لمعايرة الأجسام المضادة للفيروسات في مصل الدم، وكذلك لتحديد نوع المزارع الفيروسية المعزولة. يمكن استخدام RTGA لتشخيص تلك الالتهابات الفيروسية التي تمتلك مسبباتها الممرضة خصائص تراص الدم.

مبدأ هذه الطريقة هو أن المصل الذي يحتوي على أجسام مضادة لنوع معين من الفيروسات يثبط نشاط التراص الدموي وتبقى خلايا الدم الحمراء غير متلاصقة.

تفاعل تثبيط (تأخير) التراص السلبي (RPHA).

تشارك ثلاثة مكونات في RTPGA: المصل المناعي، والمستضد (مادة الاختبار)، وكريات الدم الحمراء الحساسة.

إذا كانت مادة الاختبار تحتوي على مستضد يتفاعل بشكل خاص مع الأجسام المضادة للمصل المناعي المعياري، فإنه يربطها، ومع الإضافة اللاحقة لكريات الدم الحمراء الحساسة لمستضد متماثل للمصل، لا يحدث التراص الدموي.

يستخدم RTPHA للكشف عن المستضدات الميكروبية، لتحديدها الكمي، وكذلك للتحكم في خصوصية RTPGA.

تفاعل تراص اللاتكس (RLA)

تستخدم جزيئات اللاتكس كحامل للأجسام المضادة (الجلوبيولين المناعي). RLA هي طريقة سريعة لتشخيص الأمراض المعدية، مع الأخذ في الاعتبار الوقت المطلوب (حتى 10 دقائق) والقدرة على اكتشاف المستضد في كمية صغيرة من مادة الاختبار.

يستخدم RLA للإشارة إلى مستضدات المكورات العقدية الرئوية، المستدمية النزلية من النوع ب، النيسرية السحائية في السائل النخاعي، للكشف عن العقديات المجموعة أ في مسحات الحلق، لتشخيص داء السلمونيلا، داء اليرسينيات وأمراض أخرى. حساسية الطريقة هي 1-10 نانوجرام/مل، أو 10³-10⁶ خلايا بكتيرية في 1 ميكرولتر.

تفاعل التخثر (CoA)

يعتمد تفاعل التخثر (CoA) على قدرة البروتين A في المكورات العنقودية على ربط جلوبيولين مناعي محدد. RCA - طريقة للتشخيص السريع - تعمل على تحديد المستضدات القابلة للذوبان بالحرارة في الإفرازات البشرية وفي تكوين المجمعات المناعية المنتشرة (CIC). يتطلب الكشف عن مستضدات معينة في تكوين CEC هطول الأمطار الأولي من مصل الدم.

رد فعل هطول الأمطار

في تفاعل الهطول (RP)، نتيجة لتفاعل الأجسام المضادة مع المستضدات القابلة للذوبان شديدة التشتت (البروتينات والسكريات)، تتشكل المجمعات بمشاركة الرواسب التكميلية. وهو اختبار حساس يستخدم لاكتشاف وتوصيف مجموعة متنوعة من المستضدات والأجسام المضادة. إن أبسط مثال على RP عالي الجودة هو تكوين شريط ترسيب غير شفاف في أنبوب اختبار عند حدود طبقة المستضد على المصل المناعي - تفاعل الترسيب الحلقي. يتم استخدام أنواع مختلفة من RP في أجار شبه سائل أو هلام الاغاروز على نطاق واسع (طريقة الانتشار المناعي المزدوج، طريقة الانتشار المناعي الشعاعي، الرحلان الكهربائي المناعي).

تفاعل التثبيت المكمل (CFR)

يعتمد تفاعل تثبيت المتمم (CFR) على ظاهرة انحلال الدم بمشاركة المكمل، أي. قادرة على اكتشاف الأجسام المضادة المثبتة للتكملة فقط.

يستخدم RSC على نطاق واسع لتشخيص العديد من الالتهابات البكتيرية والفيروسية، والتهابات الريكتسيا، والكلاميديا، وعدد كريات الدم البيضاء المعدية، والتهابات الأوالي، والديدان الطفيلية. RSC هو تفاعل مصلي معقد يتضمن نظامين: الاختبار (مصل الدم)، ويمثله الجسم المضاد للمستضد والنظام المكمل، والتحليلي (خلايا الدم الحمراء للأغنام + المصل الانحلالي). المصل الانحلالي هو مصل دم أرنب معطل بالحرارة ومحصن بكريات الدم الحمراء للأغنام. يحتوي على أجسام مضادة ضد كريات الدم الحمراء في الأغنام.

تتم ملاحظة نتيجة RSC إيجابية - غياب انحلال الدم - إذا كان مصل الاختبار يحتوي على أجسام مضادة متماثلة للمستضد. في هذه الحالة، يرتبط مجمع المستضد والجسم المضاد الناتج بالمكمل، وفي حالة عدم وجود مكمل حر، فإن إضافة النظام الانحلالي لا يصاحبه انحلال الدم. إذا لم تكن هناك أجسام مضادة مقابلة للمستضد في المصل، فلن يحدث تكوين مركب من الأجسام المضادة للمستضد، ويظل المكمل حرًا ويسبب المصل انحلال الدم لخلايا الدم الحمراء، أي. وجود انحلال الدم هو نتيجة سلبية لرد الفعل.

يوشوك إن دي، فينجيروف يو.يا.

التشخيص المختبري

يو دي سي -078

التشخيص المختبري للعدوى الفيروسية

ن.ن. نوسيك، ف.م. ستاخانوف

معهد علم الفيروسات يحمل اسم. دي. إيفانوفسكي رامز، موسكو

التشخيص المختبري للعدوى الفيروسية

ن.ن. نوسيك، ف.م. ستاتشانوفا

مقدمة

إن توسيع فرص علاج الأمراض الفيروسية والوقاية منها باستخدام الأدوية المضادة للفيروسات وأجهزة المناعة واللقاحات بآليات عمل مختلفة يتطلب تشخيصات مختبرية سريعة ودقيقة. تتطلب الخصوصية الضيقة لبعض الأدوية المضادة للفيروسات أيضًا تشخيصًا سريعًا ومحددًا للغاية لعامل العدوى. هناك حاجة إلى طرق كمية للكشف عن الفيروسات لمراقبة العلاج المضاد للفيروسات. بالإضافة إلى تحديد مسببات المرض، فإن التشخيص المختبري مهم في تنظيم تدابير مكافحة الوباء.

يسمح التشخيص المبكر للحالات الأولى من العدوى الوبائية بتنفيذ تدابير مكافحة الوباء في الوقت المناسب - الحجر الصحي، والاستشفاء، والتطعيم، وما إلى ذلك. وقد أظهر تنفيذ برامج القضاء على الأمراض المعدية، مثل الجدري، أنه عند تنفيذها، فإن الدور زيادة التشخيص المختبري. تلعب التشخيصات المختبرية دورًا مهمًا في خدمات الدم وممارسة التوليد، على سبيل المثال، تحديد المتبرعين المصابين فيروس نقص المناعة البشرية(فيروس نقص المناعة البشرية)، وفيروس التهاب الكبد B (HBV)، وتشخيص الإصابة بالحصبة الألمانية والفيروس المضخم للخلايا لدى النساء الحوامل.

طرق التشخيص

هناك ثلاث طرق رئيسية في التشخيص المختبري للعدوى الفيروسية (الجدول 1، الجدول 2):

1) الفحص المباشر للمادة لوجود المستضد الفيروسي أو الأحماض النووية.

2) عزل الفيروس وتحديده من المواد السريرية؛

3) التشخيص المصلي، على أساس تحديد زيادة كبيرة في الأجسام المضادة الفيروسية أثناء سير المرض.

مع أي نهج مختار للتشخيص الفيروسي، فإن أحد أهم العوامل هو جودة المادة التي تتم دراستها. لذلك، على سبيل المثال، للتحليل المباشر لعينة أو لعزل الفيروس، يجب الحصول على مادة الاختبار في بداية المرض، عندما يكون العامل الممرض لا يزال يُفرز بكميات كبيرة نسبيًا ولا يرتبط بعد بالأجسام المضادة، و يجب أن يكون حجم العينة كافياً للاختبار المباشر. من المهم أيضًا اختيار المادة وفقًا للمرض المتوقع، أي المادة التي يكون فيها احتمال وجود الفيروس أكبر، بناءً على التسبب في العدوى.

تلعب البيئة التي يتم فيها أخذ المادة وكيفية نقلها وتخزينها دورًا مهمًا في التشخيص الناجح. وهكذا، يتم وضع مسحات البلعوم الأنفي أو المستقيم ومحتويات الحويصلات في وسط يحتوي على بروتين يمنع فقدان عدوى الفيروس بسرعة (إذا كان من المقرر عزله)، أو في مخزن مؤقت مناسب (إذا كان من المقرر عزله) للعمل مع الأحماض النووية).

الطرق المباشرة لتشخيص المواد السريرية

الطرق المباشرة هي طرق تكتشف فيروسًا أو مستضدًا فيروسيًا أو فيروسيًا الحمض النووي(NC) مباشرة في المواد السريرية، أي أنها الأسرع (2-24 ساعة). ومع ذلك، نظرًا لعدد من خصائص مسببات الأمراض، فإن الطرق المباشرة لها حدودها (إمكانية الحصول على نتائج إيجابية كاذبة ونتائج سلبية كاذبة). ولذلك، فإنها غالبا ما تتطلب تأكيدا بطرق غير مباشرة.

المجهر الإلكتروني (EM). باستخدام هذه الطريقة، يمكنك اكتشاف الفيروس نفسه. لتحديد الفيروس بنجاح، يجب أن يكون تركيزه في العينة حوالي 1 · 10 6 جزيئات لكل 1 مل. ولكن نظرًا لأن تركيز العامل الممرض في المواد المأخوذة من المرضى يكون عادةً غير مهم، فإن البحث عن الفيروس يكون صعبًا ويتطلب ترسيبه الأولي باستخدام الطرد المركزي عالي السرعة متبوعًا بالتباين السلبي. بالإضافة إلى ذلك، لا يسمح EM بكتابة الفيروسات، نظرًا لأن العديد منها ليس لديه اختلافات شكلية داخل العائلة. على سبيل المثال، لا يمكن تمييز فيروسات الهربس البسيط أو تضخم الخلايا أو فيروسات الهربس النطاقي عمليًا من الناحية الشكلية.

أحد خيارات EM المستخدمة لأغراض التشخيص هو المجهر الإلكتروني المناعي(IEM)، حيث يتم استخدام أجسام مضادة محددة للفيروسات. نتيجة لتفاعل الأجسام المضادة مع الفيروسات، يتم تشكيل المجمعات التي يسهل اكتشافها بعد التباين السلبي.

يعتبر IEM أكثر حساسية قليلاً من EM ويستخدم في الحالات التي لا يمكن فيها زراعة الفيروس في المختبرعلى سبيل المثال، عند البحث عن مسببات أمراض التهاب الكبد الفيروسي.

رد الفعل المناعي (RIF). تعتمد الطريقة على استخدام الأجسام المضادة المقترنة بصبغة، مثل إيزوثيوسيانات الفلورسين. يستخدم RIF على نطاق واسع للكشف عن المستضدات الفيروسية في مواد المريض وللتشخيص السريع.

في الممارسة العملية، يتم استخدام نوعين مختلفين من RIF: مباشرو غير مباشر. في الحالة الأولى، يتم استخدام الأجسام المضادة للفيروسات ذات العلامات الصبغية، والتي يتم تطبيقها على الخلايا المصابة (المسحة، زراعة الخلايا). وهكذا يتم التفاعل في خطوة واحدة. إن إزعاج هذه الطريقة هو الحاجة إلى وجود مجموعة كبيرة من الأمصال المحددة للعديد من الفيروسات.

في النسخة غير المباشرة من RIF، يتم تطبيق مصل محدد على مادة الاختبار، حيث ترتبط الأجسام المضادة الخاصة بها بالمستضد الفيروسي الموجود في المادة، ثم يتم وضع مصل مضاد للأنواع على جلوبيولينات جاما للحيوان الذي يوجد فيه تم تحضير مصل مناعي محدد، على سبيل المثال، مضاد للأرنب، ومضاد للحصان، وما إلى ذلك. الميزة تتمثل النسخة غير المباشرة من RIF في الحاجة إلى نوع واحد فقط من الأجسام المضادة الموسومة.

تُستخدم طريقة RIF على نطاق واسع لفك مسببات الالتهابات الفيروسية التنفسية الحادة بسرعة عند تحليل مسحات بصمات الأصابع من الغشاء المخاطي للجهاز التنفسي العلوي. لا يمكن الاستخدام الناجح لـ RIF للكشف المباشر عن الفيروس في المواد السريرية إلا إذا كان يحتوي على عدد كبير بما فيه الكفاية من الخلايا المصابة وتلوث بسيط بالكائنات الحية الدقيقة التي يمكن أن تعطي توهجًا غير محدد.

مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA). إن طرق المقايسة المناعية الإنزيمية لتحديد المستضدات الفيروسية تشبه من حيث المبدأ طريقة RIF، ولكنها تعتمد على وسم الأجسام المضادة بالإنزيمات بدلاً من الأصباغ. والأكثر استخدامًا هو بيروكسيداز الفجل والفوسفاتيز القلوي؛ كما يتم استخدام β-جالاكتوزيداز وβ-لاكتاماز. ترتبط الأجسام المضادة الموسومة بالمستضد، ويتم اكتشاف هذا المركب عند إضافة ركيزة للإنزيم الذي ترتبط به الأجسام المضادة. يمكن أن يكون المنتج النهائي للتفاعل على شكل راسب غير قابل للذوبان، ومن ثم يتم التسجيل باستخدام مجهر ضوئي تقليدي، أو على شكل منتج قابل للذوبان، والذي عادة ما يكون ملونًا (أو يمكن أن يتألق أو يلمع) و يتم تسجيله بشكل فعال.

نظرًا لأن ELISA يمكنه قياس المستضدات القابلة للذوبان، فلا توجد حاجة لخلايا سليمة في العينة، وبالتالي يمكن استخدام مجموعة متنوعة من المواد السريرية.

ميزة أخرى مهمة لطريقة ELISA هي القدرة على قياس المستضدات، مما يسمح باستخدامها لتقييم المسار السريري للمرض وفعالية العلاج الكيميائي. يمكن استخدام ELISA، مثل RIF، بشكل مباشر وغير مباشر.

إن ELISA ذو الطور الصلب، والذي ينتج منتج تفاعل ملون قابل للذوبان، هو الأكثر انتشارًا. يمكن استخدام ELISA لتحديد المستضد (ثم يتم تطبيق الأجسام المضادة على الطور الصلب - الجزء السفلي من بئر لوحة البوليسترين) ولتحديد الأجسام المضادة (ثم يتم تطبيق المستضدات على الطور الصلب).

المقايسة المناعية الإشعاعية (RIA) . وتعتمد الطريقة على وسم الأجسام المضادة بالنظائر المشعة، مما يضمن حساسية عالية في تحديد المستضد الفيروسي. أصبحت هذه الطريقة منتشرة على نطاق واسع في الثمانينات، خاصة لتحديد علامات فيروس التهاب الكبد B والفيروسات الأخرى غير القابلة للزراعة. تشمل عيوب الطريقة الحاجة إلى العمل مع المواد المشعة واستخدام معدات باهظة الثمن (عدادات جاما).

الطرق الجزيئية. في البداية، كانت الطريقة المحددة للغاية لتهجين NA تعتبر طريقة كلاسيكية لتحديد الجينوم الفيروسي، ولكن في الوقت الحاضر يتم عزل جينومات الفيروس باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل(PCR).

التهجين الجزيئي للأحماض النووية.تعتمد الطريقة على تهجين الخيوط التكميلية من الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي (RNA) لتشكيل هياكل مزدوجة الشريط واكتشافها باستخدام الملصق. لهذا الغرض، يتم استخدام مجسات DNA أو RNA خاصة، تحمل علامة النظائر (32P) أو البيوتين، والتي تكتشف الخيوط التكميلية من DNA أو RNA. هناك العديد من المتغيرات للطريقة: - تهجين النقطة - يتم تطبيق NA المعزول والمشوه على المرشحات ثم تتم إضافة مسبار موسوم؛ إشارة إلى النتائج - التصوير الشعاعي الذاتي عند استخدام 32 ف أو تلطيخ - مع أفيدين البيوتين؛ - تهجين اللطخة هو طريقة لعزل شظايا NA المقطوعة باستخدام نوكليازات داخلية مقيدة من إجمالي الحمض النووي ونقلها إلى مرشحات النيتروسليلوز واختبارها باستخدام مجسات مُعلَّمة؛ يستخدم كاختبار تأكيدي للإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية. - التهجين في الموقع- يسمح لك بتحديد NK في الخلايا المصابة.

تفاعل البوليميراز المتسلسلاستنادا إلى مبدأ تكرار الحمض النووي الطبيعي. جوهر هذه الطريقة هو تكرار دورات متعددة من التوليف (التضخيم) لتسلسل الحمض النووي الخاص بالفيروس باستخدام بوليميريز DNA Taq القابل للحرارة واثنين من البادئات المحددة - ما يسمى البادئات.

تتكون كل دورة من ثلاث مراحل مع ظروف درجات حرارة مختلفة. وفي كل دورة يتضاعف عدد نسخ المنطقة المركبة. تعمل أجزاء الحمض النووي المُصنَّعة حديثًا كقالب لتخليق خيوط جديدة في دورة التضخيم التالية، مما يسمح، خلال 25-35 دورة، بإنتاج عدد كافٍ من النسخ من قسم الحمض النووي المحدد لتحديده، عادةً باستخدام الرحلان الكهربائي في هلام الاغاروز.

الطريقة محددة للغاية وحساسة للغاية. يسمح لك باكتشاف عدة نسخ من الحمض النووي الفيروسي في المادة قيد الدراسة. في السنوات الأخيرة، تم استخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل بشكل متزايد لتشخيص ورصد الالتهابات الفيروسية (فيروسات التهاب الكبد، والهربس، وتضخم الخلايا، والأورام الحليمية، وما إلى ذلك).

تم تطوير متغير PCR كمي يسمح للشخص بتحديد رقم النسخة لموقع الحمض النووي المضخم. هذه التقنية معقدة ومكلفة وغير موحدة بشكل كافٍ للاستخدام الروتيني.

الطرق الخلوية حاليًا لها قيمة تشخيصية محدودة، ولكن يجب استخدامها لعدد من حالات العدوى. يتم فحص مواد التشريح والخزعات والمسحات، والتي يتم صبغها وتحليلها تحت المجهر بعد المعالجة المناسبة. في حالة الإصابة بالفيروس المضخم للخلايا، على سبيل المثال، توجد خلايا عملاقة مميزة - "عيون البومة" - في أقسام الأنسجة أو في البول؛ وفي حالة داء الكلب، توجد شوائب في سيتوبلازم الخلايا (أجسام بابيس-نيجري). في بعض الحالات، على سبيل المثال، في التشخيص التفريقي لالتهاب الكبد المزمن، يكون تقييم حالة أنسجة الكبد أمرًا مهمًا.