Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный о. Диагностикум сальмонеллезный ви-антигенный Постановка рпга при титровании исследуемых сывороток крови
Набор реагентов Диагностикум Сальмонеллезный ВИ-антигенный предназначен для выявления в сыворотке крови человека специфических антител к Ви-антигену сальмонелл тифа в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА).
2.1. Принцип метода.
Действующим началом Диагностикум Сальмонеллезный ВИ-антигенный является Ви-антиген, фиксированный на поверхности эритроцитов. При взаимодействии с сыворотками, содержащими антитела к Ви-антигену, наблюдается феномен агглютинации эритроцитов.
2.2. СОСТАВ НАБОРА
| Реагенты | Количество |
| Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный Ви-антигенный жидкий — представляет собой 1% взвесь формалинизированных и сенсибилизированных Ви-антигеном сальмонелл тифа эритроцитов барана в фосфатном буферном растворе (рН 7,2 + 0,2; концентрация 0,06 моль/л). Гомогенная суспензия коричневого цвета без хлопьев; при отстаивании образуется 2 слоя: плотный коричневый осадок эритроцитов и прозрачная желтоватая надосадочная жидкость | 1 флакон — 3 мл |
| Сыворотка диагностическая сальмонеллезная адсорбированная рецептор Ви сухая — гомогенная масса от белого с коричневатым оттенком до бежевого цвета | 1 флакон – из 0,1 мл |
| 1 % взвесь формалинизированных, несенсибилизированных эритроцитов барана — гомогенная суспензия коричневого цвета без хлопьев; при отстаивании образуется 2 слоя: плотный коричневый осадок эритроцитов и прозрачная желтоватая надосадочная жидкость | 1 флакон – |
| Раствор для разведений сыворотки и постановки РПГА — 0,9 % раствор натрия хлорида — прозрачная бесцветная жидкость, рН от 6,5 до 7,5 | 2 флакона – по 8 мл |
| Планшет круглодонный для иммунологических реакций однократного применения — состоит из 8 рядов, каждый из которых включает в себя 12 лунок с прозрачным, бесцветным, круглым дном | 1 шт |
3.1. Диагностикум должен агглютинироваться в РПГА сывороткой диагностической сальмонеллезной адсорбированной рецептор Ви сухой в разведении не менее чем 1:160.
Условным уровнем диагностической характеристики сыворотки крови здоровых людей следует считать разведение сыворотки не выше 1:20.
3.2. Время проведения анализа – 2 ч.
3.3. Набор рассчитан на 8 определений.
При работе с набором следует соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР (М., 1981 г.).
Анализируемые сыворотки, а также находящиеся с ними в контакте реагенты следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять или передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции — обращаться с ними следует осторожно:
- работать в резиновых перчатках;
- при пипетировании необходимо пользоваться автоматическими дозаторами;
- при завершении работы анализируемые сыворотки и находящиеся с ними в контакте реагенты, инструменты подвергать обработке дезинфицирующим раствором
- оборудование до и после работы протирать 70 % этиловым спиртом.
Анализируемые сыворотки должны быть инактивированы при температуре 56 0 С в течение 30 мин.
Входящая в состав набора сыворотка диагностическая сальмонеллезная адсорбированная рецептор Ви сухая инактивирована.
Объективные результаты анализа гарантируются при выполнении следующих условий:
- хранение всех реагентов набора осуществлять при температуре от 2 до 8 0 С;
- не использовать реагенты с истекшим сроком годности;
- не использовать реагенты набора при отсутствии на их упаковке соответствующей маркировки;
- для проведения РПГА использовать реагенты, входящие только в данный набор.
Набор реагентов Диагностикум Сальмонеллезный ВИ-антигенный предназначен для выявления в сыворотке крови человека специфических антител к Ви-антигену сальмонелл тифа в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА).
2.1. Принцип метода.
Действующим началом Диагностикум Сальмонеллезный ВИ-антигенный является Ви-антиген, фиксированный на поверхности эритроцитов. При взаимодействии с сыворотками, содержащими антитела к Ви-антигену, наблюдается феномен агглютинации эритроцитов.
2.2. СОСТАВ НАБОРА
| Реагенты | Количество |
| Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный Ви-антигенный жидкий — представляет собой 1% взвесь формалинизированных и сенсибилизированных Ви-антигеном сальмонелл тифа эритроцитов барана в фосфатном буферном растворе (рН 7,2 + 0,2; концентрация 0,06 моль/л). Гомогенная суспензия коричневого цвета без хлопьев; при отстаивании образуется 2 слоя: плотный коричневый осадок эритроцитов и прозрачная желтоватая надосадочная жидкость | 1 флакон — 6 мл |
| Сыворотка диагностическая сальмонеллезная адсорбированная рецептор Ви сухая — гомогенная масса от белого с коричневатым оттенком до бежевого цвета | 1 флакон – из 0,1 мл |
| 1 % взвесь формалинизированных, несенсибилизированных эритроцитов барана — гомогенная суспензия коричневого цвета без хлопьев; при отстаивании образуется 2 слоя: плотный коричневый осадок эритроцитов и прозрачная желтоватая надосадочная жидкость | 1 флакон – |
| Раствор для разведений сыворотки и постановки РПГА — 0,9 % раствор натрия хлорида — прозрачная бесцветная жидкость, рН от 6,5 до 7,5 | 2 флакона – по 8 мл |
| Планшет круглодонный для иммунологических реакций однократного применения — состоит из 8 рядов, каждый из которых включает в себя 12 лунок с прозрачным, бесцветным, круглым дном | 1 шт |
3.1. Диагностикум должен агглютинироваться в РПГА сывороткой диагностической сальмонеллезной адсорбированной рецептор Ви сухой в разведении не менее чем 1:160.
Условным уровнем диагностической характеристики сыворотки крови здоровых людей следует считать разведение сыворотки не выше 1:20.
3.2. Время проведения анализа – 2 ч.
3.3. Набор рассчитан на 8 определений.
При работе с набором следует соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР (М., 1981 г.).
Анализируемые сыворотки, а также находящиеся с ними в контакте реагенты следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять или передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции — обращаться с ними следует осторожно:
- работать в резиновых перчатках;
- при пипетировании необходимо пользоваться автоматическими дозаторами;
- при завершении работы анализируемые сыворотки и находящиеся с ними в контакте реагенты, инструменты подвергать обработке дезинфицирующим раствором
- оборудование до и после работы протирать 70 % этиловым спиртом.
Анализируемые сыворотки должны быть инактивированы при температуре 56 0 С в течение 30 мин.
Входящая в состав набора сыворотка диагностическая сальмонеллезная адсорбированная рецептор Ви сухая инактивирована.
Объективные результаты анализа гарантируются при выполнении следующих условий:
- хранение всех реагентов набора осуществлять при температуре от 2 до 8 0 С;
- не использовать реагенты с истекшим сроком годности;
- не использовать реагенты набора при отсутствии на их упаковке соответствующей маркировки;
- для проведения РПГА использовать реагенты, входящие только в данный набор.
Vi-Диагностикум
Диагностикум Ви
Vi-Антигеннный
Регистрационное удостоверение № РЗН 2016/3905 от 04.04.2016 г.
НазначениеНабор реагентов "Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный Vi-антигенный для РПГА" (СЭД-Vi) предназначен для выявления антител к Vi-антигену возбудителя брюшного тифа в сыворотках крови людей реакцией пассивной гемагглютинации (РПГА).
Характеристика набора Принцип действияПри наличии антител к возбудителю брюшного тифа наблюдается гемагглютинация сенсибилизированных Vi-антигеном куриных эритроцитов, что приводит к образованию на дне U-образных лунок планшета "зонтика" из осевших эритроцитов. При отсутствии антител к возбудителю брюшного тифа осевшие эритроциты образуют "точку".
Состав набора| Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный Vi-антигенный, сухой 6 % (СЭД) | Формалинизированные куриные эритроциты, сенсибилизированные Vi-антигеном S.typhi. Сухая гигроскопическая масса коричневого цвета. После растворения — суспензия красно-коричневого цвета. | 1 фл., из 0,6 мл |
| Сыворотка диагностическая сальмонеллезная адсорбированная, рецептор Vi, сухая (в разведении 1:20, (К+)) | Кроличья сыворотка сальмонеллезная адсорбированная, рецептор Vi, в разведении 1:20. Сухая гигроскопичная пористая масса белого цвета. После растворения — прозрачная жидкость желтоватого цвета или бесцветная. | 1 фл., из 0,3 мл |
| Разбавитель исследуемых проб (РИП) | Прозрачная жидкость сине-фиолетового цвета. | 1 фл., 10 мл |
| Фосфатный буферный раствор (ФБР) | Прозрачная бесцветная жидкость. | 1 фл., 10 мл |
| Планшет полимерный для иммунологических реакций однократного применения | Планшет полимерный для иммунологических реакций однократного применения из прозрачного бесцветного полистирола. | 1 шт. |
Диагностикум должен агглютинироваться в РПГА сывороткой диагностической сальмонеллезной адсорбированной, рецептор Vi, сухой (в разведении 1:20), до титра, указанного на этикетке сыворотки. Условным уровнем диагностической характеристики сыворотки крови здоровых людей следует считать разведение сыворотки не выше 1:20. Время проведения анализа - 3040 минут. Набор рассчитан на исследование 42 сывороток крови в варианте скрининга или 10 сывороток крови в варианте их титрования.
Меры предосторожностиНабор предназначен только для in vitro диагностики. Входящие в компоненты набора вещества инактивированы и безопасны. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 и СанПиН 2.1.7.2790-10.
Дополнительное оборудование и материалыОборудование, материалы, растворы:
- дозаторы пипеточные 1-канальные с варьируемым объёмом дозирования 5 — 40 мкл; 40 — 200 мкл; 200 — 1000 мкл и 1000 — 5000 мкл;
- дозаторы пипеточные 8- или 12-канальные с варьируемым объемом дозирования 5 — 40 мкл и 40 — 200 мкл;
- вода дистиллированная (ГОСТ 6709-72).
Исследуемые образцы сыворотки крови хранят при температуре от 2 до 8 °С не более 3 суток от момента взятия крови. Допускается хранение сыворотки в замороженном состоянии при температуре не выше минус 18 °С не более 1 года. Перед использованием образцы размораживают при температуре от 16 до 25 °С и перемешивают встряхиванием. Повторное замораживание не допускается. Нельзя использовать образцы с бактериальным проростом и гемолизом. Перед постановкой реакции испытуемые сыворотки прогревают при 56 °С в течение 30 минут.
Проведение анализа Подготовка контрольной диагностической сыворотки (К+)Готовят рабочий раствор сыворотки диагностической сальмонеллезной адсорбированной, рецептор Vi, сухой (в разведении 1:20) из 0,3 мл (К+). Для этого к содержимому флакона с К+ добавляют 0,3 мл фосфатного буферного раствора (ФБР). Оставшееся количество сыворотки можно аликвотировать и хранить в замороженном состоянии при температуре не выше минус 18 °С не более 6 месяцев.
Подготовка диагностикума эритроцитарного сальмонеллезного (СЭД)Для приготовления рабочего разведения суспензии диагностикума эритроцитарного сальмонеллезного к содержимому флакона с сухим 6 % СЭД добавляют 0,6 мл дистиллированной воды и оставляют для гидратации на 2 часа при температуре от 16 до 25 °С. Затем к раствору добавляют 2,4 мл фосфатного буферного раствора (ФБР). Рабочий раствор хранят при температуре от 2 до 8 °С не более 1 мес. Замораживание не допускается.
Постановка РПГА при скрининге сывороток кровиСыворотки крови для скринингового исследования разводят в лунках планшета следующим образом:
- предварительные разведения 1:20 готовят в первых лунках планшета, внося в них сначала 190 мкл раствора РИП, затем - по 10 мкл исследуемых сывороток. Каждую сыворотку вносят отдельным наконечником и тщательно пипетируют (при этом цвет раствора в лунках после добавления сывороток должен измениться с сине-фиолетового на зеленый);
- скрининговые разведения 1:40 готовят во вторых лунках, внося в них сначала по 25 мкл раствора ФБР, а затем по 25 мкл предварительно разведенных сывороток и тщательно пипетируют.
При каждой постановке РПГА необходимо проводить контрольное определение титра К+. Для этого в 8 лунок длинного ряда вносят по 50 мкл раствора ФБР. Затем в первую лунку вносят 50 мкл рабочего раствора К+ (1:20), тщательно пипетируют и переносят в следующие лунки по 50 мкл, получая 2-кратные разведения от 1:40 до 1:5120. Еще в 4 лунки вносят по 50 мкл раствора ФБР для контроля СЭД на отсутствие спонтанной гемагглютинации.
Во все лунки планшета со скрининговыми разведениями исследуемых сывороток (кроме первых, содержащих РИП) и контролями вносят по 25 мкл СЭД. Суспензию СЭД во флаконе или ванночке перед использованием перемешать! Планшет тщательно встряхивают и оставляют при температуре от 16 до 25 °С на 30 - 40 минут до полного оседания эритроцитов в контроле.
Постановка РПГА при титровании исследуемых сывороток кровиТитрование исследуемых сывороток и рабочего раствора К+ проводят в коротких рядах планшета. Еще один короткий ряд используют для контроля на отсутствие спонтанной гемагглютинации СЭД.
В первые лунки коротких рядов для титрования исследуемой сыворотки вносят 180 мкл раствора РИП. Во все остальные лунки вносят по 50 мкл раствора ФБР.
В лунки с раствором РИП вносят 20 мкл исследуемых сывороток (получают разведение 1:10). Каждую сыворотку вносят своим наконечником и тщательно пипетируют (цвет раствора в лунках должен измениться с сине-фиолетового на зеленый). Затем из первых лунок переносят по 50 мкл в следующие лунки рядов, получая двукратные разведения от 1:20 до 1:1280. В конце титрования из последних лунок растворы в объеме 50 мкл удаляют.
При каждой постановке РПГА необходимо проводить контрольное определение титра К+. Для этого в 8 лунок длинного ряда вносят по 50 мкл раствора ФБР. Затем в первую лунку вносят 50 мкл рабочего раствора К+ (1:20), тщательно пипетируют и переносят в следующие лунки по 50 мкл, получая 2-кратные разведения от 1:40 до 1:5120.
Для контроля диагностикума на отсутствие спонтанной гемагглютинации во все лунки короткого ряда вносят по 50 мкл раствора ФБР.
Во все лунки (кроме первых лунок каждого ряда для исследуемых сывороток, содержащих РИП) вносят по 25 мкл СЭД. Суспензию СЭД во флаконе или ванночке перед использованием перемешать! Планшет тщательно встряхивают и оставляют при температуре от 16 до 25 °С на 30 — 40 минут до полного оседания эритроцитов в контроле.
Учет и интерпретация результатов Учет результатов при скрининге сывороток кровиУчет результатов проводят по условной шкале четырех крестов. Титром сыворотки считается ее разведение, дающее гемагглютинацию не менее чем на 3 (+++) креста.
- ++++ (4+) — агглютинированные эритроциты образуют на дне лунки перевернутый "зонтик", края его опадают;
- +++ (3+) — агглютинированные эритроциты образуют на дне лунки перевернутый "зонтик", края его ровные;
- ++ (2+) — наряду с агглютинированныеми эритроцитами на дне лунки имеется осадок в виде небольшого «кольца» из неагглютинированных эритроцитов;
- + (1+) — большинство эритроцитов не агглютинировано и оседает в виде небольшого «кольца»;
- (-) — неагглютинированные эритроциты образуют на дне лунки «точку».
Положительным результатом считают гемагглютинацию нагруженных Vi-антигеном эритроцитов не менее, чем на 3 креста (+++).
Контролем качества диагностикума служат 4 лунки контрольного ряда, в которые вносили только раствор ФБР и СЭД. В этих лунках не должно быть спонтанной гемагглютинации — реакция отрицательная (-). В противном случае следует повторить исследование. Если при повторной постановке появляется гемагглютинация, то препарат не используется.
Сыворотки с отрицательным результатом следует считать не содержащими антител к Vi-антигену в диагностическом титре 1:40 и ниже.
Сыворотки, дающие положительный результат в разведении 1:40, следует исследовать повторно в варианте с титрованием сыворотки для установления ее титра.
Учет результатов при титровании сывороток кровиТитром сыворотки считается ее разведение, дающее гемагглютинацию не менее, чем на 3 (+++) креста.
Контролем качества диагностикума служат лунки ряда для контроля СЭД. В этих лунках не должно быть спонтанной гемагглютинации — реакция отрицательная (-). В противном случае следует повторить исследование. Если при повторной постановке появляется гемагглютинация, то препарат не используется.
Регистрационное удостоверение № РЗН 2016/3905 от 04.04.2016 г.
НазначениеНабор реагентов "Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный Vi-антигенный для РПГА" (СЭД-Vi) предназначен для выявления антител к Vi-антигену возбудителя брюшного тифа в сыворотках крови людей реакцией пассивной гемагглютинации (РПГА).
Характеристика набора Принцип действияПри наличии антител к возбудителю брюшного тифа наблюдается гемагглютинация сенсибилизированных Vi-антигеном куриных эритроцитов, что приводит к образованию на дне U-образных лунок планшета "зонтика" из осевших эритроцитов. При отсутствии антител к возбудителю брюшного тифа осевшие эритроциты образуют "точку".
Состав набора| Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный Vi-антигенный, сухой 6 % (СЭД) | Формалинизированные куриные эритроциты, сенсибилизированные Vi-антигеном S.typhi. Сухая гигроскопическая масса коричневого цвета. После растворения — суспензия красно-коричневого цвета. | 1 фл., из 0,6 мл |
| Сыворотка диагностическая сальмонеллезная адсорбированная, рецептор Vi, сухая (в разведении 1:20, (К+)) | Кроличья сыворотка сальмонеллезная адсорбированная, рецептор Vi, в разведении 1:20. Сухая гигроскопичная пористая масса белого цвета. После растворения — прозрачная жидкость желтоватого цвета или бесцветная. | 1 фл., из 0,3 мл |
| Разбавитель исследуемых проб (РИП) | Прозрачная жидкость сине-фиолетового цвета. | 1 фл., 10 мл |
| Фосфатный буферный раствор (ФБР) | Прозрачная бесцветная жидкость. | 1 фл., 10 мл |
| Планшет полимерный для иммунологических реакций однократного применения | Планшет полимерный для иммунологических реакций однократного применения из прозрачного бесцветного полистирола. | 1 шт. |
Диагностикум должен агглютинироваться в РПГА сывороткой диагностической сальмонеллезной адсорбированной, рецептор Vi, сухой (в разведении 1:20), до титра, указанного на этикетке сыворотки. Условным уровнем диагностической характеристики сыворотки крови здоровых людей следует считать разведение сыворотки не выше 1:20. Время проведения анализа - 3040 минут. Набор рассчитан на исследование 42 сывороток крови в варианте скрининга или 10 сывороток крови в варианте их титрования.
Меры предосторожностиНабор предназначен только для in vitro диагностики. Входящие в компоненты набора вещества инактивированы и безопасны. При работе с набором следует соблюдать СП 1.3.2322-08 и СанПиН 2.1.7.2790-10.
Дополнительное оборудование и материалыОборудование, материалы, растворы:
- дозаторы пипеточные 1-канальные с варьируемым объёмом дозирования 5 — 40 мкл; 40 — 200 мкл; 200 — 1000 мкл и 1000 — 5000 мкл;
- дозаторы пипеточные 8- или 12-канальные с варьируемым объемом дозирования 5 — 40 мкл и 40 — 200 мкл;
- вода дистиллированная (ГОСТ 6709-72).
Исследуемые образцы сыворотки крови хранят при температуре от 2 до 8 °С не более 3 суток от момента взятия крови. Допускается хранение сыворотки в замороженном состоянии при температуре не выше минус 18 °С не более 1 года. Перед использованием образцы размораживают при температуре от 16 до 25 °С и перемешивают встряхиванием. Повторное замораживание не допускается. Нельзя использовать образцы с бактериальным проростом и гемолизом. Перед постановкой реакции испытуемые сыворотки прогревают при 56 °С в течение 30 минут.
Проведение анализа Подготовка контрольной диагностической сыворотки (К+)Готовят рабочий раствор сыворотки диагностической сальмонеллезной адсорбированной, рецептор Vi, сухой (в разведении 1:20) из 0,3 мл (К+). Для этого к содержимому флакона с К+ добавляют 0,3 мл фосфатного буферного раствора (ФБР). Оставшееся количество сыворотки можно аликвотировать и хранить в замороженном состоянии при температуре не выше минус 18 °С не более 6 месяцев.
Подготовка диагностикума эритроцитарного сальмонеллезного (СЭД)Для приготовления рабочего разведения суспензии диагностикума эритроцитарного сальмонеллезного к содержимому флакона с сухим 6 % СЭД добавляют 0,6 мл дистиллированной воды и оставляют для гидратации на 2 часа при температуре от 16 до 25 °С. Затем к раствору добавляют 2,4 мл фосфатного буферного раствора (ФБР). Рабочий раствор хранят при температуре от 2 до 8 °С не более 1 мес. Замораживание не допускается.
Постановка РПГА при скрининге сывороток кровиСыворотки крови для скринингового исследования разводят в лунках планшета следующим образом:
- предварительные разведения 1:20 готовят в первых лунках планшета, внося в них сначала 190 мкл раствора РИП, затем - по 10 мкл исследуемых сывороток. Каждую сыворотку вносят отдельным наконечником и тщательно пипетируют (при этом цвет раствора в лунках после добавления сывороток должен измениться с сине-фиолетового на зеленый);
- скрининговые разведения 1:40 готовят во вторых лунках, внося в них сначала по 25 мкл раствора ФБР, а затем по 25 мкл предварительно разведенных сывороток и тщательно пипетируют.
При каждой постановке РПГА необходимо проводить контрольное определение титра К+. Для этого в 8 лунок длинного ряда вносят по 50 мкл раствора ФБР. Затем в первую лунку вносят 50 мкл рабочего раствора К+ (1:20), тщательно пипетируют и переносят в следующие лунки по 50 мкл, получая 2-кратные разведения от 1:40 до 1:5120. Еще в 4 лунки вносят по 50 мкл раствора ФБР для контроля СЭД на отсутствие спонтанной гемагглютинации.
Во все лунки планшета со скрининговыми разведениями исследуемых сывороток (кроме первых, содержащих РИП) и контролями вносят по 25 мкл СЭД. Суспензию СЭД во флаконе или ванночке перед использованием перемешать! Планшет тщательно встряхивают и оставляют при температуре от 16 до 25 °С на 30 - 40 минут до полного оседания эритроцитов в контроле.
Постановка РПГА при титровании исследуемых сывороток кровиТитрование исследуемых сывороток и рабочего раствора К+ проводят в коротких рядах планшета. Еще один короткий ряд используют для контроля на отсутствие спонтанной гемагглютинации СЭД.
В первые лунки коротких рядов для титрования исследуемой сыворотки вносят 180 мкл раствора РИП. Во все остальные лунки вносят по 50 мкл раствора ФБР.
В лунки с раствором РИП вносят 20 мкл исследуемых сывороток (получают разведение 1:10). Каждую сыворотку вносят своим наконечником и тщательно пипетируют (цвет раствора в лунках должен измениться с сине-фиолетового на зеленый). Затем из первых лунок переносят по 50 мкл в следующие лунки рядов, получая двукратные разведения от 1:20 до 1:1280. В конце титрования из последних лунок растворы в объеме 50 мкл удаляют.
При каждой постановке РПГА необходимо проводить контрольное определение титра К+. Для этого в 8 лунок длинного ряда вносят по 50 мкл раствора ФБР. Затем в первую лунку вносят 50 мкл рабочего раствора К+ (1:20), тщательно пипетируют и переносят в следующие лунки по 50 мкл, получая 2-кратные разведения от 1:40 до 1:5120.
Для контроля диагностикума на отсутствие спонтанной гемагглютинации во все лунки короткого ряда вносят по 50 мкл раствора ФБР.
Во все лунки (кроме первых лунок каждого ряда для исследуемых сывороток, содержащих РИП) вносят по 25 мкл СЭД. Суспензию СЭД во флаконе или ванночке перед использованием перемешать! Планшет тщательно встряхивают и оставляют при температуре от 16 до 25 °С на 30 — 40 минут до полного оседания эритроцитов в контроле.
Учет и интерпретация результатов Учет результатов при скрининге сывороток кровиУчет результатов проводят по условной шкале четырех крестов. Титром сыворотки считается ее разведение, дающее гемагглютинацию не менее чем на 3 (+++) креста.
- ++++ (4+) — агглютинированные эритроциты образуют на дне лунки перевернутый "зонтик", края его опадают;
- +++ (3+) — агглютинированные эритроциты образуют на дне лунки перевернутый "зонтик", края его ровные;
- ++ (2+) — наряду с агглютинированныеми эритроцитами на дне лунки имеется осадок в виде небольшого «кольца» из неагглютинированных эритроцитов;
- + (1+) — большинство эритроцитов не агглютинировано и оседает в виде небольшого «кольца»;
- (-) — неагглютинированные эритроциты образуют на дне лунки «точку».
Положительным результатом считают гемагглютинацию нагруженных Vi-антигеном эритроцитов не менее, чем на 3 креста (+++).
Контролем качества диагностикума служат 4 лунки контрольного ряда, в которые вносили только раствор ФБР и СЭД. В этих лунках не должно быть спонтанной гемагглютинации — реакция отрицательная (-). В противном случае следует повторить исследование. Если при повторной постановке появляется гемагглютинация, то препарат не используется.
Сыворотки с отрицательным результатом следует считать не содержащими антител к Vi-антигену в диагностическом титре 1:40 и ниже.
Сыворотки, дающие положительный результат в разведении 1:40, следует исследовать повторно в варианте с титрованием сыворотки для установления ее титра.
Учет результатов при титровании сывороток кровиТитром сыворотки считается ее разведение, дающее гемагглютинацию не менее, чем на 3 (+++) креста.
Контролем качества диагностикума служат лунки ряда для контроля СЭД. В этих лунках не должно быть спонтанной гемагглютинации — реакция отрицательная (-). В противном случае следует повторить исследование. Если при повторной постановке появляется гемагглютинация, то препарат не используется.
Цена: по запросу
Вы можете добавить товар в корзину, указав количество
Производитель: Микроген НПО ФГУП
Страна: Россия
Ед. изм.: комплект
Вид упаковки: картонная коробка
Артикул:
Описание
Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный Vi-антигенный предназначен для постановки реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) представляет собой 0,75 % взвесь формалинизированных и сенсибилизированных Ви-антигеном эритроцитов человека О (I) группы крови в фосфатном буферном растворе (рН 7,2±0,2; концентрация - 0,06 моль/л), консервированных формалином. В комплектации с сывороткой диагностической сальмонеллезной адсорбированной рецептор Ви, сухая, раствор для разведений и планшет круглодонный для иммунологических реакций однократного применения 96-луночный. Принцип действия основан на феномене агглютинации эритроцитов при взаимодействии с сыворотками, содержащими антитела к Ви-антигену, фиксированному на поверхности эритроцитов. Рассчитан на 8 определений
Функциональное назначение
Выявления в образцах сыворотки крови человека специфических антител к Ви-антигену сальмонелл тифа. Реакция агглютинации в разведении не ниже 1/2 их титра, но не менее, чем 1:160. Условным уровнем диагностической сыворотки крови здоровых людей следует считать разведения сыворотки не выше 1:20. Диагностикум не должен агглютинироваться сыворотками диагностичесскими сальмонеллезными адсорбированными сухими для РА: О рецептор 9 - в разведении 1:40 и выше, Н рецептор d - в разведении 1:10 и выше.
Готовят двукратные серийные разведения анализируемых сывороток в 0,05 мл прилагаемого 0,9 % раствора натрия хлорида начиная с 1:10 до 1:2560 и 1 ряд двукратного серийного разведения сыворотки диагностической, начиная с разведения 1:10, до удвоенного титра, указанного на этикетке флаконов. Флаконы перед вскрытием и в ходе работы встряхивают для гомогенизации суспензии. Раскапывают в лунки прилагаемого планшета, вносят по 0,025 мл диагностикума. Ставят контроли и инкубируют в термостате. Время проведения анализа - 2 часа.
Обязательными контролями являются: контроль сыворотки диагностической сальмонеллезной адсорбированной рецептор Ви сухой и анализируемой сыворотки (в разведении 1:10 в объеме 0,05 мл) и проверка отсутствия спонтанной агглютинации диагностикума.
Учет результатов реакции производится по четырехкрестной системе:
4+ все эритроциты агглютинированы и равномерно покрывают дно лунки в виде «зонтика»;
3+ агглютинированы почти все эритроциты, на их фоне имеется малозаметное кольцо из осевших неагглютинированных эритроцитов;
3+ наряду с равномерным агглютинатом на дне лунки имеется осадок из неагглютинированных эритроцитов в виде маленького «колечка» или «пуговки»;
1+ большинство эритроцитов неагглютинировано и осело в виде маленького «колечка» с ровными краями или «пуговки» в центре дна лунки.
(-) признаков агглютинации нет. Эритроциты осели в виде маленького «колечка» с ровными краями или пуговки в центре лунки или дна пробирки.
Положительной считается реакция не менее чем на 3+.
Результаты, полученные в РПГА можно считать достоверными в том случае, если сывороткой диагностической сальмонеллезной адсорбированной рецептор Ви сухой 1:10 получен положительный результат в разведении не ниже чем 14 их титров, а в 2 лунках с анализированной сывороткой и с сывороткой диагностической сальмонеллезной адсорбированной рецептор Ви сухой в разведениях 1:10 не должно быть хлопьев и осадка; в лунках с 0,9 % раствором натрия хлорида и диагностикумом - реакция отрицательная.
Титром антител анализируемой сыворотки считается последнее разведение сыворотки, которая еще дает положительную агглютинацию эритроцитов.
Лица, у которых обнаруживаются антитела к Ви-антигену в разведении 1:40 и выше, рассматриваются как подозрительные на хроническое брюшнотифозное бактерионосительство. Однако, в связи с тем, что диагноз не может быть поставлен только на основании серологического исследования, необходимо углубленное бактериологическое обследование
Состав набора:
1. Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный Ви-антигенный, гомогенная суспензия коричневого цвета без хлопьев, при отстаивании образуются два слоя - плотный коричневый осадок эритроцитов и прозрачная желтоватая надосадочная жидкость; 6 мл - 1 флакон;
2. Диагностическая сыворотка сальмонеллезная адсорбированная рецептор Ви, сухая гомогенная масса от белого с коричневатым оттенком до бежевого цвета - в виде лиофилизата из 0,1 мл 1 флакон;
3. 1% взвесь формалинизированных, несенсибилизированных эритроцитов барана - гомогенная суспензия коричневого цвета без хлопьев, при отстаивании образуются два слоя - плотный коричневый осадок эритроцитов и прозрачная желтоватая надосадочная жидкость; 1 мл - 1 флакон;
4. Раствор для разведений сыворотки и постановки РПГА - 0,9 % раствор натрия хлорида - прозрачная бесцветная жидкость - по 8 мл 2 флакона;
5. Планшет для иммунологических реакций однократного применения состоит из 8 рядов, в каждом по 12 лунок с прозрачным бесцветным круглым дном - 1 шт.
Условия хранения: в сухом темном помещении при температуре +4...8°C. Вскрытый флакон с диагностикумом в закрытом виде можно хранить при температуре от 2 до 8 °С в течение одного месяца.
Срок годности - 18 месяцев с даты производства, указан на упаковке.
Зарегистрировано в Росздравназор
