Травмы

Метод толстого мазка под целлофаном. Микроскопическое исследование испражнений

Исходный уровень знаний и навыков.

Учащийся должен знать:

1. Представителей трематод описторха, парагонима, фасциолу, дикроцелия.

2. Жизненные циклы, пути заражения трематод, клиническую картину болезни, сроки хранения фекалий

Учащийся должен уметь:

1. Определить яйца трематод по рисункам, таблицам.

2. Формировать меры профилактики.

3. Приготовить нативный мазок, большой мазок, мазок по Като, оценить свою работу, работать с микроскопом.

4. Определять яйца трематод в препаратах, соблюдать правила охраны труда, соблюдать правила сан.-эпид. режима.

Структура занятия:

Теоретическая часть:

Ø Микролекция.

Практическая часть:

Ø Приготовление нативного мазка, большого мазка, мазка по Като, оценка работы, микроскопия

Микролекция.

Сбор и доставка материала

Окончательный диагноз гельминтозов может быть установлен только с учетом результатов лабораторных исследований. Основным методом лабораторной диагностики гельминтозов является обнаружение яиц или личинок гельминтов в фекалиях, моче, крови и других биологических жидкостях при микроскопическом исследовании. Материалами для исследований служат испражнения, содержимое двенадцатиперстной кишки, кровь, мокрота, биопсированные ткани и другие материалы.

Сбор материала для исследования производят в чистую стеклянную или пластиковую посуду, которая сопровождается направлением с указанием ФИО обследуемого. При массовом обследовании допускается сбор фекалий в стаканчики из парафинированной бумаги, целлофановые пакеты.

Испражнения для анализов должны доставляться в лабораторию непозднее одних суток, а при подозрении на стронгилоидоз - немедленно после их выделения. При нарушении этого правила постановка диагноза в связи с разрушением яиц или личинок нередко становится трудной или невозможной.

Для выявления яиц и личинок некоторых видов гельминтов используют специальные методы: метод Бормана, перианальный соскоб, метод мазков-отпечатков с помощью липкой ленты, культивирование личинок на фильтровальной бумаге (метод Харада и Мори) и др.

Практическая часть:

Наиболее распространенным методом исследования фекалий на наличие в них яиц гельминтов являются методы нативного мазка, толстого мазка под целлофаном и большого мазка.

При изучении яиц гельминтов под микроскопом целесообразно сопоставлять видимое изображение с его характеристикой в определителе яиц гельминтов.

Метод нативного мазка

Оборудование:

предметные стекла;

широкая кювета;

пластиковые палочки;

карандаш;

50 %-ный водный раствор глицерина (смешивают равные части глицерина и дистиллированной воды);

сосуд с 0,5% -ным раствором полидеза;

микроскоп.

Ход работы

1. Разложить предметные стекла в кювете, пронумеровать предметные стекла.

2. Нанести пипеткой по 2 капли 50 %-ного водного раствора глицерина на расстоянии 4 см одна от другой на предметные стекла.

3. Взять палочкой кусочек фекалий, размером со спичечную головку (30-50 мг), внести его в каплю глицерина и растереть до равномерной суспензии.

4. На каждом стекле готовят по два нативных мазка, которые не должны сливаться между собой и не доходить до краев, чтобы не испачкать пальцы лаборанта. Для каждой пробы используют новые палочки.

5. Препараты, не накрывая покровными стеклами, исследовать под микроскопом (объектив 8х, окуляр 10-15х).

6. По окончании исследования погрузить препараты в сосуд с 0,5% -ным раствором полидеза.

Метод толстого мазка под целлофаном.

Метод предложен К. Като, М. Миуром в 1954 г. Мазок представляет собой слой неразбавленных фекалий на предметном стекле, спрессованный под листком тонкого гигроскопического целлофана, пропитанного глицерином.

Рис. Приготовление толстого мазка под целлофаном:

а - нативный мазок; б - придавливание резиновой пробкой комочка фекалий, покрытых целлофаном; в - толстый мазок под целлофаном (по Ю.А. Березанцеву и Е.Г.Автушенко, 1976)

Оборудование:

широкая кювета;

полоски целлофана 22x30 мм, обработанные смесью Като в течение 24 ч;

смесь Като (3 % -ный раствор малахитового зеленого -6 мл, 6 % -ный раствор фенола - 500 мл, глицерин - 500 мл, 3,5 мл смеси хватает на 100 полосок);

резиновые пробки крупные;

пинцет анатомический;

пластиковые палочки;

карандаш;

микроскоп.

Ход работы

1. Разложить в кювете предметные стекла, пронумеровать предметные стекла.

2. Набрать палочкой фекалии размером с полгорошины (50-60 мг) и поместить на предметное стекло в центр.

3. Достать из банки пинцетом целлофановую полоску, обработанную по Като, и наложить на пробу кала на предметном стекле.

4. Придавить целлофан резиновой пробкой, чтобы кал распределился равномерно, не вытекая за края полоски.

5. Оставить препарат до просветления на 60 мин и затем исследовать под микроскопом (объектив 8-40х, окуляр 10х).

6. По окончании исследования препарат опустить в сосуд с 0,5 %-ным раствором полидеза.

7. Убрать рабочее место, вымыть руки.

Метод большого мазка.

Метод был предложен Ю.А. Березанцевым и Е.Г. Автушенко в 1973 г. Суть метода основывается на применении бинокулярного микроскопа и нативного мазка на стекле 6x9 см, позволяющего одномоментно исследовать до 200-300 мг кала.

Оборудование:

предметные стекла 6x9 см и 7x10 см;

пластиковые палочки;

50 %-ный раствор глицерина (глицерин и дистиллированная вода в равных частях);

сосуд с 0,5 %-ным раствором полидеза;

микроскоп;

эмалированная кювета;

карандаш.

Ход работы

1. Разложить предметные стекла 7x10 см в кювете, пронумеровать предметные стекла.

2. Затем на каждое предметное стекло положить второе предметное стекло 6x9 см.

3. Нанести пипеткой на предметное стекло размером 6x9 см 15-20 капель 50 % -ного раствора глицерина.

4. Взять палочкой из разных мест кусочки кала величиной со среднюю горошину (200-300 мг) и опустить его в раствор 50 %-ного глицерина на предметном стекле.

5. Растереть палочкой кусочек кала в глицерине до равномерной суспензии, чтобы занимаемая им площадь составляла около 33-34 см 2 . Мазок не покрывать покровными стеклами.

6. Взять большое покровное стекло 7x10 см за края вместе с находящимся на нем большим мазком (чтобы не запачкать пальцы).

7. Исследовать большой мазок при увеличении 34х (объектив 2х, окуляр 17х) и 50х (объектив 4х, окуляр 12,5х). В сомнительных случаях исследования проводят на большом увеличении.

8. По окончании исследования препарат опустить в сосуд с 0,5 %-ным раствором полидеза.

9. Убрать рабочее место, вымыть руки.

При таком методе исследования определяются крупные яйца гельминтов (аскариды, власоглава, анкилостомид, острицы, лентеца широкого, тениид, фасциолы). Они выглядят несколько иначе, в связи с чем необходим некоторый опыт, чтобы их быстро обнаружить. Большие мазки можно применять для исследования на яйца шистосом и личинок угрицы кишечной. Большой мазок содержит в 6-10 раз больше исследуемого материала, чем нативный мазок. Во столько же раз выше его эффективность.

Похожая информация.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕЛЬМИНТОЗОВ

Строение члеников ленточных гельминтов изучают, помещая их между двумя предметными стеклами. Членики бычьего цепня крупнее члеников свиного и лентеца широкого, они имеют больше боковых маточных ответвлений, чем у свиного цепня, - около 30 (против 7-10) (рис. 14, 15).

Членики широкого лентеца короткие, широкие и имеют в центре розетковидное выпячивание - матку (рис. 16).

Подвижны только членики бычьего цепня.

Головка каждого из цестод отличается некоторыми особенностями. Головка свиного солитера снабжена четырьмя присосками и хоботком с двумя рядами крючьев (вооруженный цепень). На головке бычьего цепня крючья отсутствуют (невооруженный цепень). Головка широкого лентеца имеет по бокам две ботрии - щели, с помощью которых широкий лентец прикрепляется к слизистой оболочке кишки (рис. 17, 18, 19).

Для выявления гельминтов исследуют испражнения, перианальную и ректальную слизь, дуоденальное содержимое, мокроту, кровь и частицы тканей. Важное значение в микрогельминтологических исследованиях имеет овоскопия, которая дает возможность поставить диагноз по форме яиц при микроскопии препаратов из кала, желчи. Некоторые гельминты локализуются вне кишок (цистицерк, трихинеллы, эхинококк). В этих случаях для диагностики используют иммунологические методы исследования, биопсию и др.

При микроскопии необходимо брать свежие испражнения либо консервировать их в 5% растворе формалина во избежание высыхания кала, при котором изменяется форма яиц и затрудняется правильная диагностика.

Исследуют их микроскопией нативного мазка, после обогащения - методом Фюллеборна, Телеманна и др.

Для приготовления нативного препарата небольшую часть фекалий берут из разных участков доставленной порции, тщательно растирают на предметном стекле в капле физиологического раствора хлорида натрия или 50% раствора глицерина. Препарат накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом (не менее 2 препаратов).

Метод Шульмана (нативный препарат) имеет определенные преимущества. С помощью этого метода можно определять яйца и личинки некоторых гельминтов. Для этого в стеклянный сосуд с водой или физиологическим раствором хлорида натрия (150 мл) погружают 3 г фекалий. Стеклянной палочкой размешивают содержимое сосуда, в результате чего в центре, у палочки, образуется воронковидное углубление. Быстро извлекают палочку и оставшуюся в ней каплю жидкости наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом, определяя яйца гельминтов и личинки.

Метод соскоба применяют для диагностики энтеробиоза, тениоза и тениаринхоза. Пользуются отточенной в виде шпателя спичкой, заостренный конец которой смочен в 1% растворе соды. Содержимое шпателя переносят на предметное стекло в каплю 1% раствора бикарбоната натрия. Сверху каплю накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом.

Метод Фюллеборна позволяет концентрировать яйца гельминтов для исследования, и поэтому вероятность обнаружения их этим способом увеличивается. Готовят раствор хлорида натрия - 350 г на 1 л воды, нагревают до кипения и фильтруют через слой ваты или марли. В фарфоровый стаканчик на 100 мл вносят 5- 10 г кала и постепенно разбавляют насыщенным раствором натрия хлорида. Клетчатку, которая всплывает, немедленно удаляют фильтровальной бумагой. Стаканчик с содержимым оставляют в вытяжном шкафу на 30 мин -1ч, на поверхности образуется пленка, в которой находятся яйца гельминтов, всплывшие в гипертоническом растворе. Проволочкой или платиновой петлей снимают пленку, наносят на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют. Методом Фюллеборна хорошо определяют яйца всех круглых гельминтов, кроме неоплодотворенных яиц аскарид, и карликового цепня. Яйца сосальщиков и крупных ленточных гельминтов всплывают плохо, поэтому целесообразно просматривать 2-4 препарата со дна сосуда.

Для накопления яиц по методу Телеманна необходимы эфир и соляная кислота. В пробирку наливают 1-1,5 мл эфира и 5-6 мл разведенной соляной кислоты, к раствору. добавляют небольшую часть экскрементов (1-2 г), взбалтывают, процеживают через густое ситечко в фарфоровую чашечку, сливают в центрифужную пробирку и центрифугируют 1 мин. В пробирке образуется три слоя: верхний содержит экстрагированные жиры, средний - соляную кислоту, в которой растворились белковые вещества, и нижний - нерастворенные частицы и яйца гельминтов. Два верхних слоя сливают и из осадка готовят 1-2 препарата, которые рассматривают под микроскопом. Недостатком метода является вредное действие соляной кислоты на оптическую систему микроскопа и деформирующее влияние ее на яйца гельминтов.

По способу Калантаря н 5 г фекалий размешивают в 10-кратном объеме насыщенного раствора нитрата натрия. Полученную эмульсию процеживают через редкую марлю. Через 10 мин готовят 5-6 препаратов из пленки с поверхности жидкости и исследуют их под микроскопом.

При описторхозе для определения интенсивности инвазии и эффективности проведенной терапии применяют метод количественного определения яиц в кале по Столлу. С этой целью в специальную стеклянную колбочку наливают 56 мл децинормального раствора едкого натра. Добавляют 4 г кала (до уровня жидкости в колбочке 60 мл) и взбалтывают со стеклянными бусами. Для исследования пипеткой набирают 0,075 мл (0,005 г) смеси, перенося на предметное стекло, накрывают покровным стеклом (22 х 23 мм) и под микроскопом считают количество яиц (содержащихся в 0,075 см3 смеси). Полученное число умножают на 200, в результате получают число яиц в 1 г кала. Ниже приводим краткую характеристику яиц гельминтов.

Оплодотворенное яйцо аскариды овальной формы с толстой многослойной оболочкой. Наружная белковая оболочка крупнобугристая, окрашена в темно-желтый цвет. Внутри яйца шаровидный бластомер. Размеры яйца 50-70х40-50 мкм. Неоплодотворенное яйцо аскарид удлиненной формы, белковая оболочка тонкая, мелкобугристая, желтого цвета. Внутри яйца крупные полигональные желтые клетки. Размеры 50-100х40- 50 мкм. Иногда яйца могут быть без белковой оболочки - прозрачные, бесцветные и покрыты ровной толстой оболочкой (рис. 20, 1, 2, 3).

Яйца власоглава овальной формы с толстой многослойной оболочкой золотисто-желтого или коричневого цвета. На полюсах - пробковидные образования. Внутри яйца - мелкозернистое содержимое. Размеры 50- 54х22-23 мкм (рис. 20, 4).

Яйца острицы неправильной овальной формы с тонкой гладкой бесцветной многослойной оболочкой. Одна сторона уплощена, другая - выпукла. Внутри яйца - зародыш на разной степени развития, вплоть до личинки. Размеры 50-60х20-30 мкм (рис. 20, 5).

Яйца анкилостом правильной овальной формы с тонкой прозрачной бесцветной оболочкой. Внутри свежевы-деленных яиц - 4 бластомера. Размеры 54-70х36- 40 мкм (рис. 20,6).

Яйца бычьего и свиного цепня одинакового строения, шаровидной формы; оболочка с 1-2 нитями. Внутри яйца онкосфера (зародыш) с толстой радиально исчерченной оболочкой темно-коричневого цвета, с шестью эмбриональными крючочками внутри. Размеры онкосферы 31х40 мкм. В испражнениях человека встречаются не яйца, а онкосферы (рис. 20, 7).

Яйца карликового цепня овальной формы, имеют тонкую бесцветную оболочку с лимоноподобной онкосферой внутри, от полюсов которой отходят длинные нитевидные придатки (филаменты). Размеры 40х50 мкм. В онкосфере 6 зародышевых крючечков (рис. 20,8).

Яйца широкого лентеца яйцевидной формы с толстой гладкой серого цвета оболочкой. Внутри яйца крупнозернистое содержимое, на верхнем полюсе - крышечка, на противоположном - бугорок. Размеры 68-71х45 мкм (рис. 20, 9).

Яйца кошачьей двуустки имеют тонкую гладкую оболочку бледно-желтого цвета с крышечкой на верхнем полюсе и шипиком на противоположном. Нижняя половина яйца расширена, внутреннее содержимое яйца мелкозернистое. Размеры 26-32X11-15 мкм.

Для обнаружения личинок анкилостомы, угрицы кишечной пользуются методом Бермана. 5 г фекалий на металлическом ситечке помещают над стеклянной воронкой, прикрепленной к штативу. На носик воронки одевают резиновую трубку с зажимом. В воронку наливают нагретую До 50° С воду так, чтобы нижняя часть ситечка с фекалиями была приближена к воде. Личинки активно переходят из кала в воду, скопляясь в нижней части резиновой трубки. Через 2 ч медленно открывают зажим, спускают воду с личинками в центрифужные пробирки, центрифугируют, из осадка на предметном стекле готовят препараты, которые рассматривают под покровным стеклом.

Для определения в крови личинок трихинелл взятую из вены кровь гемолизируют дистиллированной водой, центрифугируют и из осадка готовят препараты, которые исследуют под микроскопом.

Исследование дуоденального содержимого проводят так: желчь смешивают с равным объемом этилового эфира, центрифугируют; осадок микроскопируют. Кроме осадка, исследуют плавающие в жидкости хлопья, в которых могут быть яйца гельминтов.

При цистицеркозе и трихинеллезе исследуют также ткани. Кусочек биопсированной ткани - мышцы подкожной клетчатки, кожи - осматривают сначала невооруженным глазом для определения пузырька-цистицерка, длина которого 6-20 мм, ширина - 5-10 мм. При подозрении на цистицерк пузырек раздавливают между двумя предметными стеклами и рассматривают под микроскопом. Для цистицеркоза характерно наличие сколекса с четырьмя присосками и венчиком крючьев.

Чтобы обнаружить трихинеллы, асептически вырезанный кусочек мышцы (икроножной и др.) измельчают в 50% растворе глицерина на тонкие волоконца с помощью препаровальных игл. Эти волоконца сдавливают между двумя предметными стеклами и исследуют при малом увеличении микроскопа в затемненном поле зрения. Личинки трихинелл свернуты в мышцах в виде спирали и находятся в капсулах (рис. 21).

Рентгенологический метод исследования применяют при эхинококкозе, циетицеркозе, трихинеллезе (после обызвествления личинок) и аскаридозе.

В ряде случаев используют иммунологические методы диагностики.

Гельминты, а также продукты их жизнедеятельности обладают антигенными свойствами для организма человека. В результате пребывания гельминтов в организме человека происходит аллергическая перестройка, которая может быть выявлена специальными внутрикожными аллергическими пробами. Кроме того, в организме инвазированных образуются различные антитела - комплементсвязывающие преципитины. Методы иммунодиагностики приобретают особую ценность в тех случаях, когда не может быть использована овоскопия, в частности при трихинеллезе, эхинококкозе, цистицеркозе, аскаридозе в миграционной стадии и при инвазии только мужскими особями.

При эхинококкозе и трихинеллезе ставят реакцию латекс-агглютинации, Калюса, цистицеркозе - пробу с антигеном, приготовленным Бобровым и Возной. При некоторых гельминтозах возможно применение серологических исследований: реакция преципитации личинок аскарид с сывороткой крови больного в миграционной стадии аскаридоза, реакция преципитации сыворотки крови больного трихинеллезом с антигеном из личинок трихинелл, РСК при эхинококкозе, трихинеллезе, описторхозе, цистицеркозе.

Гельминтологические методы исследований. Методы диагностики гельминтозов разделяют на прямые, основанные на непосредственном выявлении самих гельминтов или их фрагментов, а также личинок и яиц гельминтов (методы исследования фекалий, мочи, желчи и дуоденального содержимого, мокроты, крови и тканей, материала, полученного при соскобе из перианальной области и подногтевых пространств), и косвенные, с помощью которых выявляют вторичные изменения, возникающие в организме человека в результате жизнедеятельности гельминтов (исследования морфологического состава крови, иммунологические методы диагностики гельминтозов, рентгенологические исследования и т.д.). Из прямых методов наиболее распространены копрологические, которые делятся на макро- и микрогельминтоскопические. В отдельных случаях используют специальные методы.

Макрогельмитоскопические методы исследования направлены на поиски гельминтов или их фрагментов (сколексов, члеников, частей стробилы цестод). Их применяют для диагностики тех гельминтозов, при которых яйца не выделяются с экскрементами больного или выделяются в небольшом количестве и не всегда (например, при энтеробиозе в фекалиях обнаруживают острицы, при тениидозах — членики). Для обнаружения в фекалиях остриц или члеников цестод проводят просмотр фекалий невооруженным глазом. Для дифференциальной диагностики тениидозов рекомендуется просмотр разжиженных водой фекалий отдельными небольшими порциями в черных фотографических кюветах или в чашках Петри на темном фоне. Крупные образования, подозрительные на фрагменты гельминтов, рассматривают под лупой между двумя предметными стеклами. Если же по клиническим показаниям предполагают обнаружение мелких гельминтов или головок цестод после лечения, то подозрительные частицы рассматривают под лупой в капле глицерина, а в случае необходимости и под микроскопом.

Микрогельминтоскопические методы исследования (качественные) направлены на выявление яиц и личинок гельминтов. Применяют метод толстого мазка с целлофановой покровной пластинкой по Като. Смесь Като состоит из 6 мл 3% водного раствора малахитовой зелени, 500 мл глицерина и 500 мл 6% раствора фенола. Пластинки по Като (гидрофильный целлофан разрезают на части размером 20-40 мм) погружают на 24 ч в смесь Като так, чтобы они прилегали друг к другу (3—5 мл раствора Като на 100 пластинок). 100 мг фекалий наносят на предметное стекло, накрывают целлофановой покровной пластинкой по Като и придавливают так, чтобы фекалии размазались по предметному стеклу в пределах целлофановой пластинки.

Мазок оставляют при комнатной температуре для осветления на 40—50 мин, после чего просматривают под микроскопом. В жаркое время года во избежание высыхания препарата на пластинку приготовленного препарата кладут влажную губку. Для полного выявления гельминтов всех видов метод толстого мазка с целлофановой покровной пластинкой по Като необходимо использовать в сочетании с одним из методов обогащения. Наиболее распространенными из них являются метод Калантарян и метод Фюллеборна. Метод Калантарян: в склянках с широким горлом объемом 100 мл тщательно размешивают стеклянной палочкой 5 г фекалий, постепенно доливая насыщенный раствор нитрата натрия (1 кг азотнокислого натрия на 1 л воды при кипячении) до краев стакана. Всплывшие на поверхность крупные частицы удаляют бумажным совочком. К поверхности солевого раствора прикладывают предметное стекло (солевой раствор добавляют до полного соприкосновения смеси с предметньм стеклом). Через 20—30 мин предметное стекло снимают и пленку просматривают под микроскопом. При отсутствии данной соли можно использовать насыщенный раствор поваренной соли по Фголлеборну (400 г соли в 1 л воды при кипячении).

В связи с тем, что яйца, имеющие большой удельный вес (неоплодотворенные яйца аскарид, яйца трематод и крупных цестод), не всплывают, помимо исследования поверхностного слоя жидкости, при использовании метода Фюллеборна необходимо просмотреть под микроскопом 2—4 препарата из осадка. Специальные лабораторные методы исследований на различные гельминтозы. Исследования на энтеробиоз. Обследование на энтеробиоз проводится после сна без предварительного подмывания перианальной области. Наиболее простым является обнаружение яиц остриц в перианальном соскобе с применением деревянного шпателя (спички). Соскабливание производят с поверхности перианальных складок деревянным шпателем (отточенной в виде шпателя спичкой), смоченным в 50% растворе глицерина или в 1% растворе гадрокарбоната натрия. Полученный материал тщательно счищают со шпателя краем предметного стекла на другое предметное стекло в каплю 50% раствора глицерина и микроскопируют. При обследовании работников общественного питания удобнее исследовать материал из подногтевых пространств, используя смесь из равных количеств 50% водного раствора глицерина и раствора Люголя.

Более эффективен метод использования прозрачной полиэтиленовой ленты с липким слоем путем отпечатка с перианальных складок обследуемого. В лаборатории заранее нарезают полоски липкой ленты длиной 9 см и наклеивают липким слоем на предметные стекла так, чтобы один конец выступал за край стекла на 1 см. На липкую сторону выступающего конца ленты наклеивают белую бумагу, на которой записывают порядковый номер исследования. При проведении обследования захватывают свободный конец ленты пальцами, отклеивают ее от предметного стекла до второго конца и прикладывают липким слоем к перианальным складкам. Для обеспечения полного контакта с кожей полоска приглаживается деревянным шпателем. Затем ленту отделяют от кожи и наклеивают липким слоем к предметному стеклу. Ленту хорошо разглаживают для устранения пузырьков воздуха и других неровностей.

Препарат исследуют под микроскопом. Исследования на тениидозы. Основным методом диагностики тениаринхоза служит опрос с целью установления выделения члеников тениид с фекалиями. Можно использовать также методы перианального соскоба и метод толстого мазка с целлофановой покровной пластинкой по Като. Диагностика тениоза затруднительна, т.к. членики свиного цепня активно не выделяются. При подозрении на тениоз следует провести диагностическую дегельминтизацию малыми дозами мужского папоротника или семенами тыквы. Исследования на стронгилоидоз. Диагноз стронгилоидоза ставят при нахождении в фекалиях личинок гельминта. Наиболее эффективен метод Берманна. На узкий конец стеклянной воронки надевают резиновую трубку с зажимом и укрепляют ее на металлическом штативе. В воронку помещают металлическую сетку, на которой находится 5—10 г фекалий. Приподняв сетку, заполняют воронку подогретой до 40—45° водой так, чтобы нижняя часть сетки с фекалиями была погружена в воду. Личинки из фекалий активно переходят в теплую воду и скапливаются в нижней части резиновой трубки, надетой на воронку. Через 4 ч зажим на трубке открывают и спускают жидкость в 1—2 центрифужные пробирки. После центрифугирования в течение 2—3 мин надосадочную жидкость быстро сливают, а осадок переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом.

Наиболее простой метод выявления личинок стронгилоид в фекалиях, который можно использовать при массовых обследованиях в очагах инвазии, предложен Е.С. Шульманом, В.Г. Супрягой, Г.Л. Плющевой и др. Фекалии (5 г) собирают в стаканчик и заливают обычной (водопроводной) водой комнатной температуры (10—15 мл). Через 20 мин воду сливают в чашку Петри и исследуют под микроскопом. При подозрении на строигилоидоз в случае отрицательного результата однократного исследования необходимо проводить повторные анализы с промежутками в 5—7 дней, сочетая их с исследованиями дуоденального содержимого и желчи. Дуоденальное содержимое и желчь (порции А, В, С) получают обычным путем с помощью зондирования. Из исследуемой жидкости сначала выбирают и просматривают под микроскопом плавающие в ней хлопья, а затем смешивают ее с равным количеством этилового эфира. Смесь тщательно взбалтывают и центрифугируют 10—15 мин при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а весь осадок исследуют под микроскопом.

При исследовании дуоденального содержимого можно выявить и гельминтозы с локализацией возбудителя в печени, желчном пузыре, двенадцатиперстной кишке (например, при описторхозе, фасциолезе, клонорхозе, дикроцелиозе, трихостронгилидозе). Исследования на анкилостомидозы. Для диагностики анкилостомидозов используют методы обогащения по Калантарян или Фюллеборну. Для дифференциальной диагностики анкилостомоза и некатороза рекомендуется метод культивирования личинок по Хараде — Мори в модификации Маруашвили с соавторами. На фильтровальную бумагу размером 16?3,5 наносят фекалии тонким слоем таким образом, чтобы края бумаги оставались свободными. Бумагу с фекалиями помещают в банку объемом 0,8 л, заполняют водой так, чтобы нижний край бумаги, свободный от фекалий, был погружен в воду. Банку на 5—6 дней помещают в термостат при t° 28°. Филяриевидные личинки, развившиеся за это время из яиц, спускаются по фильтровальной бумаге и оседают на дне банки. По окончании инкубации фильтровальную бумагу извлекают из банки, а жидкость исследуют под лупой. В сомнительных случаях жидкость центрифугируют, а осадок исследуют под микроскопом. Исследования на легочные гельминтозы.

Для обнаружения яиц гельминтов в фекалиях используют метод последовательных промываний. Небольшую порцию фекалий смешивают с водой в чашке Петри и оставляют до осаждения взвешенных частиц. Надосадочный слой сливают и заменяют чистой водой. Процедуру повторяют несколько раз до получения прозрачной надосадочной жидкости, отмытый осадок исследуют под микроскопом. Используют несколько проб фекалий. Исследования на трихинеллез (выявление личинок трихинелл). При компрессионном методе кусочек двуглавой или икроножной мышцы (вблизи сухожилий), взятой хирургическим путем с соблюдением асептики, расщепляют препаровальными иглами на отдельные тонкие волоконца, сдавливают их между двумя предметными стеклами в капле 50% раствора глицерина так, чтобы препарат был тонким и прозрачным. Под микроскопом с затемненным полем зрения хорошо видны личинки трихинелл. Эффективно исследование нескольких кусочков мышц в компрессориумах, используемых в ветеринарно-санитарной практике, или в специальных трихинеллоскопах.

Метод переваривания Бечмена: 1 г измельченных мышц заливают 60 мл искусственного желудочного сока (0,5 г пепсина; 0,7 мл концентрированной соляной кислоты; 100 мл воды) и выдерживают 18 ч в термостате при t° 37°, верхний слой жидкости сливают, к осадку добавляют теплую воду (37—45°) и выливают в аппарат Берманна. Через час жидкость спускают в пробирку, центрифугируют и исследуют осадок. Если личинки заключены в обызвествленные капсулы, их предварительно декальцинируют в растворе соляной, азотной или серной кислоты. Биопроба: кусочки исследуемых мышц скармливают белым мышам или крысам, у которых через 2—3 дня можно обнаружить половозрелых трихинелл в дуоденальном содержимом, а через 2—3 нед. — личинок в мышцах диафрагмы и языка. При применении гельминтологических срезов кусочки мышц фиксируют в жидкости Буэна, Ценкера или др. Обычным способом готовят срезы на микротоме и окрашивают их гематоксилином Делафильда.

Исследования на цистицеркоз. Кусочек мышечной, соединительной ткани, подкожных узелков и пр. осматривают невооруженным глазом, осторожно выделяют цистицерк (беловатый полупрозрачный пузырек размером 1—2 см), раздавливают его между двумя предметными стеклами в капле глицерина и исследуют под микроскопом. Для определения жизнеспособности выделенных из тканей цистицерков их выдерживают в 50% растворе желчи на изотоническом растворе хлорида натрия в термостаге при t° 37°; через 10—60 мин головка жизнеспособного цистицерка выворачивается наружу Обызвествленных цистицерков предварительно декальцинируют 4% раствором азотной кислоты в течение часа. Исследования на шистосомозы. Исследование мочи: не менее 5 мл мочи, собранной в середине дня, помещают в конический стакан на 30 мин, затем сливают.

Пипеткой наносят на предметное стекло каплю из осадка мочи, готовят мазок и исследуют под малым увеличением микроскопа. Добавление к осадку 1—2 капель 50% раствора глицерина значительно просветляет осадок и облегчает его исследование. Можно использовать центрифугирование (особенно при низкой интенсивности инвазии). Пробу свежей мочи помещают в 2 центрифужные пробирки по 10 мл и центрифугируют при 1000—1500 об/мин в течение 5—10 мин. Из осадка готовят препараты и исследуют под малым увеличением микроскопа. К препаратам можно добавить 1—2 капли красителя (раствора Люголя или 1—2% водного раствора метиленового синего). Это создает цветной фон, что облегчает выявление яиц шистосом. При исследовании фекалий методом их осаждения — в коническом стакане емкостью 200 мл смешивают 1 г фекалий с 1—2 мл растворителя (50% раствора глицерина и изотонический раствор хлорида натрия в соотношении 1:1). Разводят содержимое растворителем до объема сосуда и дают отстояться и течение 20—30 мин. Надосадочную жидкость сливают, а осадок исследуют под микроскопом.

Для получения лучшей концентрации осадок нужно ресуспендировать в растворителе до получения взвеси и дать ей отстояться в коническом стакане в течение 10 мин. Осадок с придонного слоя забирают пастеровской пипеткой, помещают 2 капли на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. При использовании метода осаждения по Ритчи в сосуде смешивают примерно 2 г фекалий с 10 мл изотонического раствора хлорида натрия и помещают в центрифужную пробирку емкостью 15 мл. Пробирку закрывают пробкой и встряхивают в течение 30 с. Пробку удаляют, а содержимое центрифугируют в течение 2 мин при 2000 об/мин. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, добавляют к осадку 10 мл 10%, раствора формалина, тщательно смешивают и дают смеси отстояться 5 мин. Добавляют в нее 3—4 мл эфира, закрывают пробирку пробкой, встряхивают, удаляют пробку и центрифугируют 2 мин.

Аппликатором удаляют детрит, сливают надосадочную смесь формалина с эфиром, осадок с придонного слоя забирают пастеровской пипеткой и исследуют под малым увеличением микроскопа. Количественные методы диагностики гельминтозов применяют при необходимости установить интенсивность инвазии. Эти методы позволяют судить об эффективности дегельминтизации, давать оценку действия различных антигельминтных препаратов, а также могут служить контролем проводимых массовых лечебно-профилактических мероприятий. Работа с фекалиями в лаборатории. Для исследования берут фекалии из разных мест порциями в стеклянную или пластмассовую посуду, парафиновые стаканчики, на которые наклеивают этикетку с указанием фамилии, имени, отчества, возраста и адреса обследуемого. Количество фекалий должно быть не менее 1/4 стакана, т.к. небольшие порции испражнений быстро высыхают и яйца в них деформируются. Кроме того, может возникнуть необходимость в повторном исследовании другими методами. Фекалии для исследований следует доставлять в лабораторию в течение 1 сут. после дефекации, а при исследовании на стронгилоидоз сразу после дефекации.

В случае необходимости длительного хранения материала и для транспортировки в качестве консервантов используют жидкость Барбагалло (в 1000 мл воды растворяют 8,5 г поваренной соли и 30 мл формалина) или жидкость Шуренковой (1900 мл 0,2% водного раствора нитрата натрия, 250 мл крепкого раствора Люголя, 300 мл неразведенного формалина, 25 мл глицерина); либо растворов стирального порошка: 1% раствор Лотоса или 1,5% раствор Экстры (в весовом соотношении фекалий и раствора стирального порошка 1:5). После проведения анализов посуду дезинфицируют: кипятят или выдерживают в течение 5 ч в 5% растворах фенола, лизола, 2% растворе крезола. При регистрации результатов анализов названия гельминтов обозначают по современной номенклатуре (латинское название). Иммунологические метолы диагностики наиболее эффективны при гельминтозах, возбудители которых обитают непосредственно в тканях или в ранней фазе своего развития мигрируют по кровеносному руслу и внутренним органам хозяина.

Используют аллергические реакции (кожную и внутрикожную пробу) и иммунологические реакции: реакцию кольцепреципитации (РКП) для диагностики трихинеллеза; латекс-агглютинации (РЛА) с диагностикумом длительного срока хранения для диагностики эхинококкоза и альвеококкоза; непрямой гемагглютинации (РНГА) для диагностики эхинококкоза, цистицеркоза мозга и преиматинальной фазы аскаридоза; иммунофлюоресцирующих антител (РИФА) для диагностики цистицерков и трихинеллеза; микропреципитации на личинках (РМПЛ) для диагностики нематодозов (преимагинальной фазы аскаридоза; анкилостомидозов, трихинеллеза); иммуноферментную реакцию (ИФР) для диагностики эхинококкоза, альвеококкоза, описторхоза, трихинеллеза; реакцию связывания комплемента (РСК) для диагностики трихинеллеза и цистицеркоза. Применяют также реакцию иммуно-электрофореза (РИЭФ) и двойной диффузии в геле (РДДГ).

Библиогр.: Березанцев Ю.А. и Автушенко Е.Г. Гельминтологическая копрологическая диагностика, Л., 1976; Лейкина Е.С. Важнейшие гельминтозы человека, с. 335, М., 1967; Унифицированные методы клинических лабораторных исследований, под ред. В.В Меньшикова, вып. 4, с. 275, М., 1972.

Для обнаружения фрагментов гельминтов фекалии просматривают невооруженным , затем смешивают с водой и исследуют небольшими порциями в чашке Петри на темном фоне. Все подозрительные частицы помещают на предметное стекло в каплю воды и исследуют под лупой. Можно суточную порцию поместить в цилиндр с добавлением 5-10-кратного количества воды. После размешивания сосуд оставляют до полного осаждения взвешенных частиц. Поверхностный слой жидкости сливают и наливают чистую воду. Отмытый осадок просматривают небольшими порциями в невооруженным глазом или под лупой. Для обнаружения яиц применяют микроскопические методы исследования.

Метод нативного мазка. Небольшое количество кала из разных мест исследуемой порции растирают на предметном стекле в капле 50% раствора глицерина, изотонического раствора хлорида натрия или воды. Смесь накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом.

Метод всплывания по Фюллеборну. Одну часть испражнений размешивают в 20 частях насыщенного раствора хлорида натрия (удельный вес 1,18), добавляемого небольшими порциями. Всплывшие на поверхность крупные частицы немедленно удаляют, а смесь оставляют на 45 мин. В течение этого времени яйца гельминтов, имеющие меньший удельный вес, чем раствор хлорида натрия, всплывают на поверхность. Поверхностную пленку снимают проволочной петлей диаметром около 1 см и переносят на предметное стекло для исследования под микроскопом.

Метод Калантарян. Эффективность метода всплывания повышается при замене хлорида натрия насыщенным раствором азотнокислого натрия. В этом случае смесь выдерживают 10-15 мин.

Поверхностную пленку, образующуюся после отстаивания смеси кала с раствором хлорида натрия или азотнокислого натрия, можно снимать и предметным стеклом. С этой целью баночку, налитую до краев смесью испражнений с раствором соли, накрывают предметным стеклом так, чтобы нижняя его поверхность соприкасалась с жидкостью. После отстаивания стекло снимают и, быстро повернув кверху поверхностью, на которой находится пленка, просматривают под микроскопом.

Соскоб сперианальных складок (для выявления яиц остриц и онкосфер бычьего цепня) делают утром до совершения туалета. Деревянным шпателем, смоченным в воде или в 50% растворе глицерина, производят соскабливание вокруг анального отверстия. Полученный материал переносят на предметное стекло в каплю воды или 50% раствора глицерина и просматривают под микроскопом. Шпатель можно заменить влажным ватным тампоном, которым протирают перианальную область, затем хорошо прополаскивают в воде. Воду центрифугируют и осадок исследуют под микроскопом.

Метод Берманна (для выявления личинок). Металлическую сетку с нанесенными на нее 5-6 г фекалий укрепляют на стеклянной воронке, вставленной в штатив. На нижний конец воронки надевают резиновую трубку с зажимом. Воронку наполняют водой, подогретой до t° 50°, так, чтобы нижняя часть сетки с калом соприкасалась с водой. Личинки активно переходят в воду и скапливаются в нижней части резиновой трубки. Через 4 часа жидкость спускают в центрифужные пробирки, центрифугируют и осадок просматривают под микроскопом.

Анализ мокроты, носовой слизи и влагалищных выделений для выявления яиц легочной трематоды парагонимуса, личинок аскарид и анкилостомид, яиц остриц, фрагментов эхинококкового пузыря. Исследуемую порцию слизи (выделений) намазывают на стекло и просматривают на черном и белом фоне макроскопически, а затем под микроскопом. Можно добавить к исследуемому материалу 25% раствор антиформина, тщательно взболтать и выдержать 1-1,5 часа в для растворения слизи. Смесь центрифугируют и осадок исследуют под микроскопом.

Анализ дуоденального и желудочного сока для выявления яиц печеночных трематод, анкилостомид, личинок Strongyloides. Все три порции дуоденального содержимого, полученные при , центрифугируют и осадок исследуют под микроскопом. Так же исследуют и .

Исследование тканей. Для выявления личинок трихинелл кусочки биопсированной мышцы тщательно расщепляют на волоконца, сдавливают между компрессорными стеклами (толстые стекла с винтами) и исследуют под микроскопом с затененным светом. Для выявления цистицерков мышцы расслаивают препаровальными иглами, выделенный пузырек очищают от окружающей ткани, сдавливают между двумя предметными стеклами и исследуют под лупой.

Анализ крови (для выявления личинок филярий). Исследуют висячую каплю на покровном стекле, окантованном вазелином. Можно 0,3 мл крови смешать с 10-кратным количеством 3% раствора . Смесь центрифугируют и осадок исследуют под микроскопом. Для обогащения препаратов к 1 мл венозной крови прибавляют 3 мл 2% раствора формалина или 5-кратное количество жидкости, состоящей из 95 мл 5% раствора формалина, 5 мл уксусной кислоты и 2 мл концентрированного спиртового раствора гематоксилина. Смесь центрифугируют, осадок промывают дистиллированной водой путем и исследуют под микроскопом. Для дифференцирования разных видов филярий исследуют мазки, окрашенные по методу Гимзы - Романовского.

Методы иммунологической диагностики. Применяют (агглютинации, связывания комплемента) и аллергические диагностические пробы (см.) с из соответствующего вида гельминта.

Гельминтологические методы исследования. Рис. Яйца гельминтов. 1-10 - яйца круглых червей (нематод): 1 - 3 - аскариды (1 - оплодотворенное яйцо, 2 - оплодотворенное яйцо без белковой оболочки, 3 - неоплодотворенное яйцо); 4 - аскариды кошачьей; 5 -аскариды плотоядных; 5 -острицы; 7 - власоглава; 8 - томинкса; 9 - анкилостомид; 10 - трихо-стронгилид. 11- 15 - яйца ленточных червей (цестод): 11 - цепня бычьего; 12 - цепня карликового; 13 - цепня крысиного; 14 - цепня тыквовидного; 15 -лентеца широкого. 16 - 24 - яйца сосальщиков (трематод): 16 - трематоды (шистосомы) японской; 17 - трематоды (шистосомы) моче - половой; 18 - трематоды (шистосомы) Мансона; 19 - трематоды (парогонимус) легочной; 20 - трематоды (описторхис) сибирской (кошачьей); 21 - трематоды (клонорхис) китайской; 22 - трематоды (метагонимуса) кишечной; 23 - трематоды (фасциолы) печеночной; 24 - трематоды (дикроцелиум) ланцетовидной.

Гельминтологические методы исследований . Методы диагностики гельминтозов разделяют на прямые, основанные на непосредственном выявлении самих гельминтов или их фрагментов, а также личинок и яиц гельминтов (методы исследования фекалий, мочи, желчи и дуоденального содержимого, мокроты, крови и тканей, материала, полученного при соскобе из перианальной области и подногтевых пространств), и косвенные, с помощью которых выявляют вторичные изменения, возникающие в организме человека в результате жизнедеятельности гельминтов (исследования морфологического состава крови, иммунологические методы диагностики гельминтозов, рентгенологические исследования и т.д.). Из прямых методов наиболее распространены копрологические, которые делятся на макро- и микрогельминтоскопические. В отдельных случаях используют специальные методы.

Макрогельмитоскопические методы исследования направлены на поиски гельминтов или их фрагментов (сколексов, члеников, частей стробилы цестод). Их применяют для диагностики тех гельминтозов, при которых яйца не выделяются с экскрементами больного или выделяются в небольшом количестве и не всегда (например, при энтеробиозе в фекалиях обнаруживают острицы, при тениидозах - членики).

Для обнаружения в фекалиях остриц или члеников цестод проводят просмотр фекалий невооруженным глазом. Для дифференциальной диагностики тениидозов рекомендуется просмотр разжиженных водой фекалий отдельными небольшими порциями в черных фотографических кюветах или в чашках Петри на темном фоне. Крупные образования, подозрительные на фрагменты гельминтов, рассматривают под лупой между двумя предметными стеклами. Если же по клиническим показаниям предполагают обнаружение мелких гельминтов или головок цестод после лечения, то подозрительные частицы рассматривают под лупой в капле глицерина, а в случае необходимости и под микроскопом.

Микрогельминтоскопические методы исследования (качественные) направлены на выявление яиц и личинок гельминтов. Применяют метод толстого мазка с целлофановой покровной пластинкой по Като. Смесь Като состоит из 6 мл 3% водного раствора малахитовой зелени, 500 мл глицерина и 500 мл 6% раствора фенола. Пластинки по Като (гидрофильный целлофан разрезают на части размером 20´ 40 мм ) погружают на 24 ч в смесь Като так, чтобы они прилегали друг к другу (3-5 мл раствора Като на 100 пластинок). 100 мг фекалий наносят на предметное стекло, накрывают целлофановой покровной пластинкой по Като и придавливают так, чтобы фекалии размазались по предметному стеклу в пределах целлофановой пластинки. Мазок оставляют при комнатной температуре для осветления на 40-50 мин, после чего просматривают под микроскопом. В жаркое время года во избежание высыхания препарата на пластинку приготовленного препарата кладут влажную губку.

Для полного выявления гельминтов всех видов метод толстого мазка с целлофановой покровной пластинкой по Като необходимо использовать в сочетании с одним из методов обогащения. Наиболее распространенными из них являются метод Калантарян и метод Фюллеборна.

Метод Калантарян: в склянках с широким горлом объемом 100 мл тщательно размешивают стеклянной палочкой 5 г фекалий, постепенно доливая насыщенный раствор нитрата натрия (1 кг азотнокислого натрия на 1 л воды при кипячении) до краев стакана. Всплывшие на поверхность крупные частицы удаляют бумажным совочком. К поверхности солевого раствора прикладывают предметное стекло (солевой раствор добавляют до полного соприкосновения смеси с предметньм стеклом). Через 20-30 мин предметное стекло снимают и пленку просматривают под микроскопом. При отсутствии данной соли можно использовать насыщенный раствор поваренной соли по Фголлеборну (400 г соли в 1 л воды при кипячении).

Специальные лабораторные методы исследований на различные гельминтозы.